宁志丰，刘复兴，武 倩

(1.咸宁学院基础医学院人体解剖学教研室，湖北 咸宁 437100;2.咸宁学院基础医学院病理学教研室;3.咸宁学院护理学院)

胃癌是一种在全球发病率仅次于肺癌的恶性肿瘤，对于其发病机制仍然不清楚。本研究运用免疫组化的方法试图阐明主要的错配修复基因hMLH1在胃癌的表达、与胃癌临床病理参数及与患者临床进展间的关系。

1 材料与方法

1.1 标本

收集咸宁市中心医院普外科于2000年1月至2005年12月的胃癌石蜡标本66例。其中男性39例，女性27例;年龄32～77岁，平均61.6±12.3岁;高中分化癌39例，低分化癌27例;无淋巴结转移者35例，有淋巴结转移者31例。

1.2 胃癌组织中hMLH1蛋白的表达

将石蜡组织块切成4μm厚切片。采用免疫组化SP法进行染色，具体方法按说明书(兔抗人单克隆抗体购自Santa Cruz公司，1∶100稀释;SP试剂盒购自武汉博士德生物工程公司)进行。DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。以PBS代替一抗作为阴性对照，选取已知阳性的切片作为阳性对照。

1.3 结果判定

胃黏膜细胞核或胞浆内出现黄色颗粒者视为阳性细胞，计数5个高倍视野或500个细胞。按胞核或胞浆内染色强度打分:0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。再按阳性细胞所占的百分比打分:0分:阴性，1分:0%＜阳性细胞≤10%，2分:10%＜阳性细胞≤50%，3分:50%＜阳性细胞≤75%，4分:75%＜阳性细胞≤100%。染色强度与阳性细胞百分比的乘积＞3分者为强阳性。

1.4 随访

采用电话随访、登门拜访或写信的形式进行术后无瘤生存期、5年生存率的调查。

1.5 统计学方法

将所得结果及临床资料建立数据库，采用SPSS 13.0软件进行 χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。……