王恩军 季文琦 靳 祎 柴广军 王 哲 王 静

1．河北大学，河北 保定 071000;2．河北省保定市高阳县医院，河北 高阳 0715000;3．河北省保定市第二医院，河北 保定 071000;4．河北省保定市一中分校，河北 保定 071000

山茱萸中含有挥发油、糖类、有机酸类、酯类等多种化学成分，具有良好的应用价值和开发前景［1］。本试验采用人肺癌A549细胞作为试验模型，研究山茱萸水、醇提取物体外抗肺癌活性，为研发山茱萸的抗癌活性成分提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 材料 ①山茱萸:原生药从河北安国县药材公司购买;②人肺癌A549细胞:由河北农业大学生命科学院提供。

1.2 实验方法

1.2.1 山茱萸提取物的制备

1.2.1.1 醇提取物的制备 称取山茱萸样品500g，按1:6的比例 (W/V)加入3000mL75%(v/v)乙醇浸泡过夜，回流提取两次，每次2h。合并两次提取液抽滤，弃去滤渣，滤液旋转蒸发浓缩后，加入5倍量的蒸馏水沉淀除去水不溶性杂质，抽滤，滤液冷冻干燥得到山茱萸醇提取物，实验前用生理盐水稀释成合适浓度，滤器除菌，4℃冰箱保存备用。

1.2.1.2 水提取物的制备 称取山茱萸样品500g，加蒸馏水3000 mL浸泡过夜，100℃水浴1 h，抽滤除去不溶物质，真空减压蒸馏至少量，冷冻干燥得山茱萸水提取物，实验前用生理盐水稀释成合适浓度，滤器除菌，4℃冰箱保存备用。

1.2.2 MTT法检测山茱萸提取物对A549细胞增殖的影响试验方法见文献［2］，试验分三组:阴性对照组加入生理盐水，阳性对照组加入顺铂 (20μg/mL)，实验组加入不同浓度的山茱萸水、醇提取物，计算细胞增殖的抑制率及半数抑制率 (IC50)。

1.2.3 形态学观察 取5×104个/mL的A549细胞接种于48孔培养板内，培养24 h，实验组加入80 mg/mL的山茱萸水、醇提取物，对照组加入生理盐水，培养48 h后在倒置显微镜下观察细胞的形态变化。……