杨宇清，郑一敏，胡 杨，乐 亮，江 娟，王 宁，林海珠

(重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆 400054)

随着社会的进步，人们越来越追求方便、快捷、安全、健康的食品，但是食品在加工、储藏过程中很容易受到细菌、霉菌、酵母的污染，导致腐败变质，因此，研发安全、有效的食品防腐剂，是食品工业发展的关键问题之一［1］。枯草芽孢杆菌在自然界中广泛存在，对人畜无害，且不污染环境，具有极好的抗菌活性和极强的抗逆能力［2－3］，其代谢产物具有极高利用价值和开发前景［4］。本文以一株本实验室分离得到的具有很强拮抗作用的枯草芽孢杆菌为研究对象，对其摇瓶发酵培养基及发酵条件进行优化，为该菌种规模化发酵提供依据。

1 材料与方法

1.1 菌种与培养基

1.1.1 菌种

供试菌株:枯草芽孢杆菌3－2(重庆理工大学药学与生物工程学院天然药物实验室保藏);指示菌株:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌(重庆理工大学药学与生物工程学院天然药物实验室保藏)。

1.1.2 培养基

种子液体培养基:酵母膏 5.0 g，蛋白胨10.0 g，NaCl 10.0 g，蒸馏水 1 000 mL，pH 值为7.0 ～7.2;种子固体培养基:在液体培养基的基础上添加1.5%琼脂粉;指示菌培养基:同种子培养基。

1.2 发酵液的制备

保存菌种经活化后从斜面上挑取一环接种于装有30 mL种子培养基的100 mL的三角瓶中，37℃ 下180 r/min摇床培养12 h，制得种子液。以5%接种量将种子液接种到装有200 mL发酵培养基的500 mL的三角瓶中，37℃下180 r/min摇床培养24 h制得发酵液。

1.3 指示菌悬液的制备［5］

保存菌种经活化后从斜面上挑取一环接种于装有30 mL种子培养基的100 mL的三角瓶中，37℃ 下180 r/min摇床培养24 h，制得菌悬液.用10倍稀释法将菌液稀释、计数，求得菌悬液浓度，稀释成106～107mL－1保存备用。……