姚建波，吴志军，陈志宝

（黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319）

原生质体融合是近年来迅速发展的一项有效的育种技术，通过细胞内染色体遗传物质的转移实现基因重组[1-2]。该技术首先通过酶解作用除去细胞壁，使细胞成为原生质体，然后利用物理、化学或生物手段将两种不同亲株的原生质体融合，使细胞内的遗传物质发生重组交换，并经筛选获得集双亲优良性状于一体的稳定融合子[3]。原生质体融合技术与传统的诱变技术相结合，极大地促进了微生物育种技术的提高。基于原生质体融合的基因组重排技术[4]在育种领域得到广泛的应用[5-6]。

中心组合试验设计（Central Composite Design，CCD）[7]采用科学的试验设计方法，可以减少试验次数并且提高了试验的精密度。响应面分析方法（Response Surface Methodology）[8]是将统计学与数学相结合一种有效的的手段，在微生物、化工、食品、工程等方面有广泛的应用[9-10]。T.Suzuki等人[11]通过析因设计探索了三个不同的因素对（变形杆菌）Prototheca zopfii原生质体制备条件的影响。Muralidhar等人[12]利用响应面设计方法对影响灰黄青霉（Penicillium griseofulvum）原生质体的因素进行了优化，获得了制备其原生质体的最佳条件。Deb等人[13]利用溶菌酶除去枯草芽孢杆菌细胞壁的方法，制备了枯草芽孢杆菌原生质体，并通过原生质体融合的方法，获得了产木聚糖酶的融合子。

通过中心组合试验设计和响应面分析的方法对影响枯草芽孢杆菌BS-1101原生质体形成的关键因素进行优化，为原生质体融合育种方法和基因组重排技术提供参考。……