樊占兵

(滦县人民医院普外一科，河北 滦县 063700)

生长抑素是存在于胃黏膜、胰岛、胃肠道神经、垂体后叶和中枢神经系统中的肽激素，能够抑制胃分泌和蠕动，以及在下丘脑/垂体中抑制促生长素的释放，是一种具有广泛的生物效应的环状多肽类激素[1]。人工合成生长抑素类似物如醋酸奥曲肽注射液(善宁)是一种天然生长抑素的八肽衍生物，它保留了与生长抑素类似的药理作用，且作用持久[2]。在动物实验中，善宁抑制生长激素、胰高糖素和胰岛素的作用较生长抑素更强，且对生长激素和胰高糖素的选择性更高。长期(26周)给药，大鼠的剂量达1 mg/(kg·d)(腹膜内注射)，狗的剂量达0.5 mg/(kg·d)(静脉注射)，均能被很好耐受[3]。有研究表明，奥曲肽不仅能抑制绝大多数具有神经内分泌功能的肿瘤增殖，对普通的实体性肿瘤亦存在抑制作用[4]。黄芪是祖国医学里一味常用的中药，在临床上应用广泛。也有研究表明，传统的补气药黄芪具有抗肿瘤能力。实验证实，黄芪在体内和体外均有抗肿瘤作用。但二者的报导均较少见。二者联合的抗肿瘤研究更少[5]。本研究通过建立人结肠癌裸鼠原位种植转移模型探讨生长抑素联合应用黄芪对裸鼠结肠原位移植瘤生长和转移的作用及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 建立裸鼠人结肠癌原位移植瘤模型 制作裸鼠人结肠癌原位种植转移模型，采用BALB/C裸鼠81只[购自上海斯莱克实验动物有限责任公司：SCXK(沪)2011—0010]，全为雄性，鼠龄5周左右，体重20 g左右，在SPF级条件下饲养。在超净生物层流架内饲养裸鼠，定期环境紫外线消毒，保持恒温、恒湿，高压蒸汽灭菌笼具、饮水，在无菌罩内进行实验操作。采用中国科学院上海细胞所提供的人的结肠癌瘤株，在裸鼠腹股沟接种癌细胞的悬液，得到实体瘤后将瘤组织切成2 mm×2 mm×2 mm的瘤块。用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉实验裸鼠。无菌罩内常规消毒皮肤，经腹正中切口入腹，钳出盲肠壁，于肠末端切开浆膜，将肿瘤组织块缝入盲肠切开处。

1.2 实验分组及所用药物 采用随机分组方法将荷瘤鼠分为4组，每组20只，种植后第1天开始腹腔注射药物，每12 h注射1次，各组所用药物如下：生长抑素联合黄芪组：腹腔注射注射善宁注射液50 μg/(kg·次)+黄芪注射液500 mg/(kg·次)；生长抑素组：腹腔注射善宁注射液50 μg/(kg·次)；黄芪组：腹腔黄芪注射液500 mg/(kg·次)；D组：生理盐水组，腹腔注射生理盐水10 μl/(g·d)。

1.3 评价指标 移植瘤瘤体积：种植后35 d，将荷瘤鼠处死，取出原位肿瘤，用游标卡尺测量肿瘤的长径(a)、短径(b)，按公式计算肿瘤体积：V(mm3)=∏/6×(a+b)3。肿瘤抑制率：肿瘤抑制率=(1-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100%。相对肿瘤增殖率：(实验组相对肿瘤体积/对照组相对肿瘤体积)×100%。肝、肺或腹膜转移率：处死小鼠后，检查肝、肺和腹膜，对可疑转移病灶送病理检查，肝、肺或腹膜转移率=(肝、肺或腹膜转移裸鼠个数/该组裸鼠总个数)×100%。腹水发生率：检查荷瘤鼠结肠癌转移情况标本用10%甲醛固定、包埋后苏木精一伊红染色，作组织病理学检测。观察腹水出现情况。腹水发生率=(腹水发生裸鼠数/该组裸鼠总个数)×100%。

1.4 统计学处理 采用SPSS13.0统计学分析软件包进行数据处理，计量资料采用均值±标准差（±s）表示，计量资料行t检验，计数资料用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 四组裸鼠平均移植瘤瘤体积的比较 生长抑素联合黄芪组的平均移植瘤瘤体积小于其他三组，差异均有统计学意义(P＜0.01)；生长抑素组与黄芪组的平均移植瘤瘤体积差异无统计学意义(P＞0.05)，而生理盐水组的平均移植瘤瘤体积最大，见表1。

表1 四组裸鼠的平均移植瘤瘤体积比较（±s）

表1 四组裸鼠的平均移植瘤瘤体积比较（±s）

组别 只数 移植瘤瘤体积(mm3)t值P值生长抑素联合黄芪组生长抑素组黄芪组生理盐水组20 20 20 20 1061±165 1361±251 1392±326 1698±435＞10.3621 0.3369＜0.01 0.3737＞19.6184＜0.01

2.2 四组裸鼠肿瘤抑制率的比较 生长抑素联合黄芪组的肿瘤抑制率高于其他三组，差异均有统计学意义(P＜0.01)，生长抑素组与黄芪组的肿瘤抑制率差异无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

表2 四组裸鼠的肿瘤抑制率比较（±s）

表2 四组裸鼠的肿瘤抑制率比较（±s）

χ2组别生长抑素联合黄芪组生长抑素组黄芪组生理盐水组只数20 20 20 20肿瘤抑制率(%)89.34±3.45 60.31±6.81 61.52+5.21 0 20.7764 0.6310 P值＜0.01 0.2643

2.3 四组裸鼠相对肿瘤增殖率的比较 生长抑素联合黄芪组的相对肿瘤增殖率小于其他三组，差异均有统计学意义(P＜0.01)，生长抑素组与黄芪组的相对肿瘤增殖率差异有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 四组裸鼠的相对肿瘤增殖率比较（±s）

表3 四组裸鼠的相对肿瘤增殖率比较（±s）

组别生长抑素联合黄芪组生长抑素组黄芪组生理盐水组只数20 20 20 20相对肿瘤增殖率(%)25.62±6.94 53.61±12.36 63.95±15.92 100 χ2 8.8306 2.2943 P值＜0.01 0.0110

2.4 四组裸鼠肝、肺或腹膜转移率的比较 生长抑素联合黄芪组的肝、肺或腹膜转移率(10%)小于其他三组，差异均有统计学意义(P＜0.01)，生长抑素组与黄芪组的肝、肺或腹膜转移率差异无统计学意义(P＞0.05)，生理盐水组的肝、肺或腹膜转移率最大，见表4。

表4 四组裸鼠的肝、肺或腹膜转移率比较

2.5 四组裸鼠腹水发生率的比较 生长抑素联合黄芪组的腹水发生率(10%)小于其他三组，差异均有统计学意义(P＜0.01)，生长抑素组与黄芪组的腹水发生率差异无统计学意义(P＞0.05)，D组(生理盐水组)的腹水发生率最大，见表5。

表5 四组裸鼠的腹水发生率比较

3 讨论

研究证实生长抑素能抑制不同正常细胞和肿瘤细胞的生长和发展。在体内和体外实验中，生长抑素类似物对多种实验室模型显示出抗肿瘤作用[6]。奥曲肽注射液(善宁)是一种人工合成的天然生长抑素的八肽衍生物，它保留了与生长抑素类似的药理作用，且作用持久[7]。研究表明，奥曲肽不仅能抑制绝大多数具有神经内分泌功能的肿瘤增殖，对普通的实体性肿瘤亦存在抑制作用[8]。黄芪是祖国医学里一味常用的中药，在临床上应用广泛，而传统的补气药黄芪具有抗肿瘤能力，在体内和体外均有抗肿瘤作用[9-11]。本研究通过建立人结肠癌裸鼠原位种植转移模型探讨生长抑素联合应用黄芪对裸鼠结肠原位移植瘤生长和转移的作用。本研究结果提示生长抑素联合黄芪组在抑瘤率和相对肿瘤增值率，肝、肺或腹膜转移率，腹水发生率等方面均优于生长抑素组和黄芪组(P＜0.01)，其具体机制有待进一步研究。

综上所述，笔者认为生长抑素联合应用黄芪比单独应用生长抑素或黄芪更能显著抑制裸鼠结肠原位移植瘤的生长和转移，临床可考虑使用。

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