李彩霞 曾 星 黄 羽 张国伟 张 娴 杨 明 (广州中医药大学第二附属医院,广州 510006)

膀胱内灌注卡介苗(Bovis bacillus calmetteguerin,BCG)是公认的治疗浅表性膀胱癌的首选疗法,也是术后最有效的预防复发的措施[1]。但是BCG在多种灌注治疗药物中的副作用严重,因此,如何减少其副作用并提高疗效也是BCG应用中的重要研究课题。本研究在前期体外实验的基础上,研究膀胱癌动物模型受BCG,以及猪苓或猪苓多糖(Polyporus polysaccharide,PPS)协同BCG刺激后腹腔巨噬细胞TLR4(Toll-like receptors 4,TLR4)和相关分子的表达,分析猪苓及猪苓多糖协同BCG诱导的免疫反应与减少BCG毒副作用的内在联系,为研制减毒增效的中西医结合膀胱灌注药物提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 雌性Fisher344大鼠,7周龄,购于北京维通利华实验动物有限公司;猪苓,购于江苏天阴药业有限公司,每克相当于10克生药,用前按剂量溶于生理盐水;猪苓多糖,购于广东华南药业集团有限公司,用前按剂量溶于生理盐水;BBN购于日本TCI株式会社;糖精,购于上海第六制药厂;BCG:60 mg/支,130万单位每毫克,用前溶于3 ml生理盐水中;Griess试剂盒,购于美国PROMEGA公司;CD14-FITC、CD86-FITC、CD40-PE 购于美国 eBioscience公司;TLR4-PE购于美国Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 动物模型复制及实验分组 雌性Fisher344大鼠随机分为5组,每组10只,即生理盐水组(Control),模型组(BBN),BCG组、BCG+猪苓多糖(PPS)组、BCG+猪苓(ZL,250 mg/kg)组,除生理盐水组外,其它4组实验大鼠从实验开始到第8周给予含0.05%BBN的饮用水,第8周后,实验大鼠开始给予含5%糖精的饮用水,至第20周截止,其它4组实验大鼠从实验开始到第8周给予含0.05%BBN的饮用水,第8周后,实验大鼠开始给予含5%糖精的饮用水,至第20周截止,从第9周开始给予猪苓及猪苓多糖供试物,给予剂量为1 ml/100 g,BCG每周灌注一次,每周每只2 mg,连续给予6周,之后停止灌注4周,再每3周灌注一次,至实验结束。……