张丽娟，李海燕，郝光涛，刘泽源

西酞普兰为选择性很强的5-羟色胺摄取抑制剂(SSRI)，其抗抑郁作用是抑制中枢神经系统中的5-羟色胺能神经元对 5-羟色胺的再摄取［1］，同时对胆碱能毒蕈碱受体、组织胺受体和α-肾上腺素能受体无抑制作用［2］，因此，会减少很多抗抑郁药物引起的毒副作用，如口干、镇静、体位性低血压等［3］。西酞普兰对肝脏细胞色素P450代谢酶影响很小［4］，因此，临床上有较强的抗抑郁作用，不良反应和药物间相互作用较少，安全范围大。常用在抑郁症的急性期和长期维持治疗，可使患者的《儿童抑郁评分量表—改良版(CDRS-R)》评分获得改善［5］，尤其适用于老年及共病躯体疾病抑郁症患者的治疗［6］。本试验考察国产氢溴酸西酞普兰咀嚼片与进口氢溴酸西酞普兰片的生物等效性［7］，为临床安全、合理用药提供理论依据。

1 材料、对象和方法

1.1 药品试剂与仪器

1.1.1 药品与试剂 氢溴酸西酞普兰咀嚼片(昆明积大制药有限公司提供，10 mg/片，批号:100301);氢溴酸西酞普兰片(商品名:喜普妙，丹麦灵北药厂生产，20 mg/片，批号:2202204);氢溴酸西酞普兰对照品(中国药品生物制品检定所提供，含量:99%，批号:100790-200501);内标:盐酸苯海拉明(中国药品生物制品检定所提供，批号:100066-200807);甲醇和乙腈均为色谱纯(DIMA公司);其他试剂为分析纯。

1.1.2 仪器 API 3000型三重四极杆串联质谱仪，配有电喷雾离子化源以及Analyst 1.4.2数据处理软件(美国Applied Biosystem公司);Agilent 1200高效液相色谱系统，包括四元输液泵、自动进样器、切换阀(美国Agilent公司);GL-88B旋涡混合仪(海门市其林贝尔仪器制造有限公司);AB104电子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司);2K-15高速低温离心机(美国Sigma公司);Milli-Q Plus纯水器(美国密理博中国有限公司)。

1.2 受试者选择 24例中国健康男性受试者的平均年龄为(24.5±3.2)岁，身高(1.69±0.06)m，体重(60.7±4.6)kg，体重指数为(21.37±1.33)kg/m2。试验前生命体征、血常规、尿常规、肝功能、肾功能、心电图及胸透等检查未发现异常。受试前2周未服用任何其他药物，受试者均自愿参加并签署知情同意书。

1.3 给药方案与血样采集 本试验采用双周期、随机、自身交叉试验设计，试验在解放军307医院I期临床试验病房进行。

24名健康受试者随机进入2个试验组，每组12名。每组受试者每次试验时分别服用受试制剂或参比制剂。受试制剂空腹咀嚼30～60 s后直接吞咽，参比制剂空腹用200mL温开水送服。服药后2 h方可再饮水，4 h后统一进食低脂标准餐。两次用药间隔2周。本试验两种制剂的服用剂量均为20 mg，一次服用。

分别于给药前及给药后 1、2、3、4、6、8、12、24、36、48、72、96、120、144 h 各取静脉血5mL 左右置于肝素处理的试管中，静置约0.5 h，3000 r/min离心10min，分离血浆;血浆样品置－20℃冰箱保存。

1.4 样品测定方法

1.4.1 标准溶液的配制 西酞普兰标准溶液的配制:精密称取氢溴酸西酞普兰对照品12.5 mg，置于50mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得200μg/mL西酞普兰的标准储备液，取该储备液以甲醇依次稀释，配成浓度分别为100μg/L、50μg/L、25μg/L、10μg/L 、2.5μg/L、1μg/L、0.5μg/L 的西酞普兰标准溶液。内标(苯海拉明)标准溶液的配制:精密称取盐酸苯海拉明对照品5.7 mg，置于25mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得200μg/mL的内标储备液，倍比稀释该储备液至10μg/L，对照品溶液于4℃冰箱保存作为内标待用。

1.4.2 色谱条件 色谱柱:Agilent-ZORBAX-C8柱(4.6mm ×150mm，5μm)，流动相:乙腈∶0.1%甲酸水溶液 =60∶40;流速:0.5mL/min;柱温:20 ℃;进样量:10μL。

1.4.3 质谱条件 离子源:电喷雾离子化源(ESI源);离子极性:正离子(Positive);离子检测方式:多反应监测(MRM)方式;喷射电压:5400 V;离子源温度:450℃;源内气体1(GS1，N2)压力:8 psi;源内气体2(GS2，N2)压力:7 psi;气帘气体(N2)压力:6 psi;碰撞能量(CE):27 V(西酞普兰)、13V(苯海拉明);碰撞能量(DP):50 V(西酞普兰)、30V(苯海拉明);碰撞气(CAD，N2)压力:6 psi;用于定量分析的离子反应对分别为质荷比 m/z 325.1→m/z 262.1(西酞普兰)和m/z 256.2→m/z 167.1(苯海拉明，内标)。

1.4.4 血浆样品分析方法 准确量取50μL血浆样品于一洁净EP管中，加入50μL内标溶液(10μg/L 苯海拉明甲醇溶液)，补加 1050μL 甲醇溶液，混合均匀，4℃、15000 r/min离心10min，取上清液800μL，40 ℃ 水浴氮气挥干，150μL纯水复溶，进样10μL进行HPLC-MS/MS分析。

1.5 方法学考察与评价

1.5.1 质谱分析 取西酞普兰和苯海拉明标准储备液适量，用甲醇稀释成浓度为1μg/mL的甲醇液，按“1.4.3”项操作，相应的二级全扫描质谱图见图1。

图1 西酞普兰和内标苯海拉明的产物离子质谱扫描图

1.5.2 特异性 分别取6例受试者的空白血浆进行方法特异性考察。结果表明，空白血浆中的内源性物质不干扰西酞普兰和苯海拉明的测定。见图2。

1.5.3 标准曲线及定量下限 取空白血浆50μL，分别精密加入标准系列溶液的西酞普兰对照品溶液50μL 和内标溶液50μL，旋涡混匀，配成含西酞普兰的浓度分别为 0.5、1、2.5、10、25、50、100μg/L的标准含药血浆，按“1.4.4”项下操作，记录色谱图，计算西酞普兰峰面积As和内标峰面积Ai的比值f(f=As/Ai)。以血浆中待测物浓度(X)为横坐标，待测物与内标的峰面积比值(Y)为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算［8］，求得回归方程:Y=0.0399X-0.00309，r=0.9979，权重系数w=1/x2。按上述条件测得的西酞普兰在血浆中的定量下限为0.5μg/L。

图2 血浆中西酞普兰和内标苯海拉明的典型MRM色谱图(I西酞普兰;II苯海拉明)

1.5.4 精密度和准确度(相对回收率)按“1.4.4”项下操作。每天做1批及1条随行标准曲线，连续做3 d，共3批，每批每个浓度做6份样品，记录色谱图，计算西酞普兰峰面积As和内标峰面积Ai的比值f，代入当天的标准曲线求得实测浓度，计算批内、批间精密度和准确度(相对回收率)。见表1。

表1 血浆中西酞普兰的批内、批间精密度(RSD)和准确度(相对回收率)(%，n=18)

1.5.5 样品稳定性 西酞普兰检测样品进样器中放置6 h、血浆样品在室温放置4 h及－40℃ 反复冻融3次及－40℃ 冻存2个月条件下，进行样品稳定性考察，RE均在±15%内，稳定性良好。

1.6 数据处理 用SPSS软件进行统计学分析。药代动力学参数的计算:根据血药浓度-时间曲线计算每个受试者口服受试制剂及参比制剂后的血药浓度。根据血药浓度-时间曲线末端直线部分的试验点，以lnC对t进行回归，求得消除速率常数ke;T1/2=0.693/ke;Cmax、Tmax为试验的实测值，以梯形面积法计算 AUC0-tn，AUC0-∞=AUC0-tn+Ctn/ke(tn为最后一次可检测血药浓度的采样时间;Ctn为末次可测定样品的药物浓度);CL/F=D/AUC0-∞(D为给药剂量);Vd/F=CL/F/Ke。相对生物利用度 F，以公式计算:F=(AUCT×DR)/(AUCR×DT)×100%(T为受试制剂，R为参比制剂，D为剂量)。

2 结果

2.1 血药浓度-时间曲线 24例受试者服用受试制剂和参比制剂后西酞普兰血药浓度-时间曲线见图3。

图3 受试者服用受试制剂和参比制剂后血浆中西酞普兰平均血药浓度-时间曲线

2.2 药代动力学参数和生物利用度 受试者单次口服受试制剂及参比制剂后的平均药代动力学参数见表2。

表2 受试者单次口服T和R后西酞普兰的平均药代动力学参数

2.3 生物等效性评价 将药代动力学参数Cmax、AUC0-tn和AUC0-∞经对数转换后进行方差分析，双单侧t检验，计算90%置信区间，对Tmax进行非参数检验。AUC0-tn、AUC0-∞、Cmax的 90% 的置信区间分别为 84.5%～96.90%、84.64%～97.03%、84.16%～96.15%。对Tmax的实测值进行检验，P＞0.05。结果表明，受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

2.4 安全性评价 整个试验过程中未出现与试验相关的严重不良事件。参加试验的24例受试者中有7例受试者出组时出现尿常规和/或血生化检查异常，血生化检查异常的项目为总胆红素、直接胆红素、尿酸和甘油三酯一过性增高。未经任何治疗而给予密切观察处理，一段时间后恢复正常。

3 讨论

本试验建立的人血浆中西酞普兰浓度的测定方法简便可靠、准确性强、重现性好，血药浓度在0.5～100μg/L范围内线性关系良好，符合氢溴酸西酞普兰人体药代动力学及生物利用度研究的要求。

药代动力学参数表明，受试制剂和参比制剂在人体内吸收、分布、消除规律较为接近。受试制剂的相对生物利用度F0-tn和F0-∞分别为91.92% ±15.10%和92.09%±15.52%。经生物等效性评价，受试制剂和参比制剂具有生物等效性。

药物的吸收程度和速度随剂型不同而不同，受试制剂氢溴酸西酞普兰片经咀嚼30～60 s后直接吞咽，咀嚼后药物颗粒有效面积增大，从而促进药物释放与吸收，理论上受试制剂应吸收较快。本试验中，受试制剂及参比制剂的实测平均达峰时间Tmax分别为(4.42±2.41)h和(5.00±2.87)h，受试制剂达峰时间比参比制剂平均提前约35min，符合咀嚼片吸收较快的趋势，但经统计学分析，二者差异无统计学意义(P＞0.05)，这可能是受试者例数较少所致。

西酞普兰片为临床常用药物，经查阅文献，未发现药物不良反应中有对肝脏功能损伤的报道，使用说明书中也未列举该种不良反应。但参加试验的24例受试者中，有7例受试者出组时出现尿常规和/或血生化检查异常，血生化检查异常的项目为总胆红素、直接胆红素、尿酸和甘油三酯一过性增高。考虑受试者主诉无任何不适及其他临床症状，其余化验项目也未见有临床意义的改变，未经任何治疗而给予密切观察处理，一段时间后恢复正常。分析治疗后化验结果异常原因，不排除受试者在住院期间体力活动减少及试验期间作息与饮食改变引起的指标一过性异常。综合以上因素，判断此不良反应与试验药物可能有关。

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