蔡素芬 黄久遂 吴小纯

高效液相色谱法测定苯海拉明薄荷霜中盐酸苯海拉明的含量

蔡素芬 黄久遂 吴小纯

目的 建立测定苯海拉明薄荷霜中盐酸苯海拉明的含量方法。方法 采用高效液相色谱法（HPLC），色谱柱为Phenomenex Luna-CN柱（200.0 mm×4.6 mm，5 µm），流动相为乙腈-水-三乙胺（50∶50∶1）（用冰醋酸调节pH值至6.5），流速为1.0 ml/min，检测波长为258 nm。结果 盐酸苯海拉明在0.0411～0.6170 mg/ml浓度范围内，线性关系良好（r=0.9998），测得平均回收率为99.28%，RSD为0.81%。结论 本方法准确、灵敏、可靠，可用于苯海拉明薄荷霜的含量测定。

苯海拉明薄荷霜；盐酸苯海拉明；HPLC；含量测定

苯海拉明薄荷霜为笔者自制制剂，用于治疗皮肤瘙痒、亚急性湿疹、皮炎及其他各种过敏性皮肤病，临床疗效明显。原质量标准中含量测定为硝酸银滴定法，滴定终点不明显，误差较大，不能有效控制质量。本所结合药典方法[1]并参考文献[2-4]采用高效液相色谱法（HPLC）测定苯海拉明薄荷霜中盐酸苯海拉明的含量，操作简便、结果准确，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪，Agilent色谱工作站，盐酸苯海拉明对照品（批号200807，含量99.9%，中国药品生物制品检验所）；苯海拉明薄荷霜（本院制剂，批号20140402）；乙睛（色谱纯，Merck）；三乙胺（分析纯）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为 Phenomenex Luna-CN柱（200.0 mm×4.6 mm，5 µm），流动相为乙腈∶水∶三乙胺（50∶50∶1）（用冰醋酸调节pH值至6.5），流速为1.0 ml/min，检测波长为258 nm，进样量为20 µl，理论塔板数按盐酸苯海拉明色谱峰计不得低于4 000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液取盐酸苯海拉明对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成每毫升中约含1 mg溶液，作为对照品储备液。

2.2.2 样品溶液 取本品1 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加流动相适量，置 75 ℃水浴中加热使溶解，放冷至室温，加流动相至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2 h，取出后迅速用0.45 µm的微孔滤膜滤过，即得。

2.2.3 空白溶液 按处方配制不含盐酸苯海拉明的空白基质，精密称取1 g，按2.2.2项下方法制备空白溶液。

2.3 线性关系考察 精密量取盐酸苯海拉明对照品储备液1.0、2.0、5.0、10.0、15.0 ml分别置25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。各取20 µl进样，测定峰面积，以盐酸苯海拉明浓度（C）对峰面积（A）进行线性回归，得回归方程：Y=1827.6X+1.8681，r=0.9998（n=5），盐酸苯海拉明在浓度0.0411～0.6170 mg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验 取浓度为 0.4112 mg/ml的对照品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，测得维生素E峰面积RSD=0.45%。

2.5 干扰试验 取盐酸苯海拉明对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液按上述色谱条件分别进样，记录色谱图，见图 1，结果表明盐酸苯海拉明色谱峰（保留时间）6.2 min处无干扰。

图1 HPLC色谱图

2.6 重复性试验 取同一批样品（批号20140402）6份，分别按供试品溶液的测定项下方法测定，结果盐酸苯海拉明平均含量为98.93%，RSD=0.72%。

2.7 稳定性试验 取20140402批样品溶液，分别于 0、2、4、6、8、10 h测定，计算含量，结果RSD=0.85%，表明样品溶液在10 h内稳定。

2.8 回收率试验 精密量取空白基质9份，按80%、100%、120%的浓度分别加入盐酸苯海拉明对照品，每个浓度3份，分别按供试品溶液的测定项下方法测定，见表1。

表1 回收率试验结果

2.9 样品测定 按溶液制备项下方法，分别制备对照品溶液与样品溶液，按上述色谱条件进样，测定盐酸苯海拉明含量，见表2。

表2 样品含量测定结果(%)

3 讨论

3.1 流动相的选择 本实验采用不同比例的乙腈、水、三乙胺为流动相，只有在乙腈-水-三乙胺（50∶50∶1）（用冰醋酸调节pH值至6.5）条件下的理论板数、分离度、重复性符合要求。

3.2 提取溶剂的选择 筛选的溶剂有甲醇、流动相。实验中发现，采用甲醇作为溶剂，测得拖尾因子为0.81；采用流动相作为溶剂，测得拖尾因子为0.92，所以选择流动相作为提取溶剂。

综上所述，本方法准确、灵敏、可靠，可用于苯海拉明薄荷霜的含量测定。

[1]中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典[s].二部.北京∶化学工业出版社,2010∶724-724.

[2]刘惠军,吴骥宇.HPLC法测定盐酸苯海拉明口服溶液中盐酸苯海拉明和苯甲酸钠的含量[J].中国临床药学杂志,2008,17(3)∶183-183.

[3]毛庆,许昕,杨必勇,等.RP-HPLC法测定消炎镇痛膏中盐酸苯海拉明的含量[J].中国药房,2009,20(13)∶1017-1017.

[4]陈晓峰,张咏梅,汪明志.RP-HPLC法同时测定复方曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和盐酸苯海拉明的含量[J].中国药房,2013, 24(5)∶446-447.

Content determination of Diphenhydramine Hydrochloride in Diphenhydramine Menthol Cream by HPLC

Cai Sufen Huang Jiusui Wu Xiaochun

Objective To establish an HPLC for determination of Diphenhydramine Hydrochloride in Diphenhydramine Menthol Cream.Methods Phenomenex Luna-CN (200.0 mm×4.6 mm,5 μm) column was used.The mobile phases consisted of acetonitrile.water and triethylamine(50:50:1)(adjusted to pH 6.5 with glacial acetic acid).The flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength was 258 nm.Results The linear range of Diphenhydramine Hydrochloride was 0.0411 to 0.6170 mg/ml(r=0.9998)and the average recovery was 99.28% (RSD=0.81%). Conclusion This method is accurate、reliable and applicable for the determination of Diphenhydramine Hydrochloride in Diphenhydramine Menthol Cream.

Diphenhydramine Menthol Cream;Diphenhydramine Hydrochloride;HPLC;Content determination

R927.2

A

1673-5846(2015)01-0030-02

广州市皮肤病防治所，广东广州 510095