宗兆文,张连阳,沈 岳,郭庆山,任永川,冉新泽,史春梦,程天民

(1.第三军医大学大坪医院/野战外科研究所全军战创伤中心创伤科,重庆400042;2.第三军医大学全军复合伤研究所国家创伤、烧伤与复合伤重点实验室复合伤分室,重庆400038)

脊髓损伤(spinal cord injury)后的功能恢复是医学研究的难点之一,其修复的主要策略包括减少脊髓损伤后的继发性损伤,采用组织或细胞移植促进中枢神经系统的可塑性变化以及应用刺激神经生长的因子和(或)阻断抑制轴突生长的物质以促进受损轴突的再生等[1-2]。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)是研究最为广泛的神经营养素之一,在神经系统中的作用广泛而强大。大量的实验证实,BDNF可以保护脊髓运动神经元,并可促进红核脊髓束和皮质脊髓束轴突再生或出芽[3-4]。而干细胞移植被认为是修复脊髓功能损伤最有前景的方法之一,本课题前期实验发现真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cell,dMSCs)可在体外被诱导为神经元和胶质细胞[5-7],其他学者也证实dMSCs移植后可促进脊髓损伤后的功能恢复[8]。为了同时发挥dMSCs和BDNF的修复效果,本研究观察了BDNF腺病毒表达载体(adenovirus vector of BDNF,Adv-BDNF)感染的dMSCs移植后对脊髓损伤的修复效果,报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物和主要试剂 Wistar大鼠购自第三军医大学大坪医院动物所。Adv-BDNF由本实验室张正丰博士构建并馈赠。兔抗鼠BDNF多克隆抗体和异硫氰酸荧光素(fluoresceine isothiocyanate,FITC)结合的第二抗体购自Sigma-Aldrich公司。免疫组化试剂盒购自Boster公司。细胞培养用培养瓶、培养基及血清等购自Hyclone公司。

1.2 dMSCs的分离培养与转染 参照本研究所建立的早期贴壁法进行dMSCs的分离培养和鉴定[9]。……