徐 畅 宫丽鸿 赵添成 杜玉洁

1辽宁中医药大学（辽宁沈阳110032）

2辽宁中医药大学附属医院（辽宁沈阳110032）

活心汤为本文通信作者宫丽鸿主任医师经验方。具有抗凝、抗血栓促纤溶作用，用于治疗和改善动脉粥样硬化，临床疗效良好。活心汤中有多味药如全蝎，蜈蚣等都有息风止痉的功效，而白术、半夏等都有燥湿化痰的功效。故活心汤能很好的体现搜风祛痰之法。本实验旨在观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞 （HUVECs）iNOS mRNA及ET-1 mRNA表达的影响，为临床用药提供实验依据。

1 材 料

1.1 药物活心汤组方：全蝎 15g，蜈蚣2条，地龙20g，陈皮15g，半夏15g，白术15g,水蛭15g。以上药材由辽宁中医药大学附属医院中药局提供，加工制成含生药2g/mL中药浓缩液，4℃冰箱保存备用。

1.2 动物健康新西兰大耳白兔（辽宁中医药大学动物实验中心）清洁级，雌雄不拘，体质量2.0～2.5kg。

1.3 仪器及试剂高速冷冻离心机（Sigma 3C15K，美国）；超净工作台（苏州净化公司）；CO2恒温培养箱（Therom HERAce11150）；倒置显微镜（Olympus IX71 ）；PCR 仪（Biometra UnioⅡ型，德国）；紫外分光光度计（UV-3000，英国）；凝胶自动成像及分析系统（Chemi Imager 5500，美国）；AngⅡ（美国 Sigma 公司）；胰蛋白酶（美国 Gibco公司）；DMEM（美国 Gibco公司）；PCR引物（北京华大基因公司合成）；胎牛血清（天津市灏洋生物制品科技有限责任公司）。

2 方 法

2.1 药物血清制备将兔随机分为4组，每组5只。活心汤高、中、低剂量组参照文献［1］给予活心汤200mL灌胃，质量浓度分别为9.0、4.5、2.25mL/kg。空白对照组给等容积的蒸馏水。连续5d，每日2次，第5日灌胃后2h（灌药前禁食12h,不禁水）颈动脉放血，分离血清，56℃ 30min灭活，低温干燥，置-80℃冰箱中保存备用，临用时用DMEM培养液配成10mg/mL的浓度，再用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌。……