李晓华,王作书,王瑞卿,张 妍,明 月*

(1.吉林大学第二医院 眼科,吉林 长春130041;2.吉林省消防总队医院,吉林 长春130061)

人参三醇组皂甙(Panoxatriol saponins,PTS)是由西洋参根中提取,主要含有 Re、Rf、Rg1、Rg2和 Rh1,具有增强免疫功能、促进学习记忆、抗衰老、抗肿瘤、清除氧自由、改变碳水化合物和脂质代谢等多种生物学效应[1-3];本室以往研究已证实人参茎叶总皂甙(Ginsenoside of Stems and Leaves,GSL)(含 Rb2、Rc、Rd 、Re、Rf、Rg2)和西洋参根源人参二醇组皂甙(Rb1、Rb2、Rc、Rd)具有抑制 RPE 细胞增殖的作用,由于PTS与GSL的成分相近,我们进一步观察了PTS对培养的人RPE细胞增生的影响。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂

培养的RPE细胞来源于孕32周流产胎儿人胚眼,主要试剂包括:改良的Eagle培养液(Delbecco,s modified Eagle,s medium DMEM 培养液)(GIBCO),胎牛血清(FCS,GIBCO),溴化二甲噻唑二苯四氮唑蓝(MTT,北京华美生物工程公司),二甲基亚砜(DMSO,国产分析纯),3H-TdR购自北京原子能研究所,放射强度为1 mCi。西洋参根源PTS由吉林大学基础医学院天然药物化学研究室惠赠,淡黄色粉末,实验前用DMEM溶解配成不同浓度。

1.2 方法

1.2.1RPE细胞的培养 人胚眼球在无菌条件下,沿扁平部剪开,剔除前部组织、玻璃体及视网膜感觉部,后节眼杯用PBS液漂洗后在解剖显微镜下分成4块展平后,放入DMEM培养液中,显微镜下剥离RPE层,将得到的 RPE置于0.25%胰蛋白酶(trypsin)中消化30 min,FCS终止消化,注吸法分离RPE,离心、清洗后接种于含20%FCS的DMEM 培养液,置于37℃,5%CO2的孵箱中培养。RPE细胞为贴附型细胞,取第5代用于实验。

1.2.2药物浓度与效应关系实验 RPE细胞经酶消化后制成细胞密度2×104/ml细胞悬液,每孔2 ml接种于24孔塑料培养板,孵育24 h后加入PTS,使其终浓度为 0 、5、10、50、100、150、200、300、40、500 μ g/ml,每种浓度3孔,培养12 h后,更换成不含药物的培养液继续培养24 h,Trypsin消化制成细胞悬液,给药组和对照组各取3孔台盼蓝染色计数,计算抑制率。……