李延红，周占业，史 齐，皇甫超申

(河南大学医学院环境医学研究所，河南开封 475004)

人体亚硝酸盐不仅是一氧化氮(nitric oxide，NO)代谢过程中的一种惰性产物［1］，而且在细胞信号传导以及维持内环境NO稳态中起重要的作用［2］。通常情况下，组织氧含量正常，体内NO由一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase，NOS)产生;但是在组织缺氧时，体内NO则来自于亚硝酸盐还原途径［3］。有实验证实低浓度的亚硝酸盐及其还原产生的NO共同通过抑制细胞线粒体活性氧(Reactive oxygen species，ROS)的产生、减少氧的消费、激活NO/cGMP通路等一系列事件发挥细胞保护、血管再生、舒张血管的功能，从而拮抗缺血/再灌注(ischemia-reperfusion，I/R)诱导的组织损伤［4］。低剂量亚硝酸钠不仅对细胞无明显毒害，而且对细胞增殖有促进作用［5］。乙醇对脑组织的损伤主要是通过ROS实现的，从理论上分析，用低浓度的亚硝酸盐预处理，神经元可以拮抗乙醇诱导的细胞凋亡。为此，本实验选用大鼠嗜铬细胞瘤细胞(rat pheochromoeytoma cells，PC12)［6］探讨亚硝酸盐对乙醇诱导的细胞过氧化损伤的拮抗作用，为科学评价亚硝酸盐药理作用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1主要试剂与仪器

1.1.1主要试剂PC12细胞系购自中国医学科学院基础医学研究所。亚硝酸钠(NaNO2)，天津市晨福化学试剂厂(分析纯);DMEM培养基(Gibco，with high glucose);胎牛血清，杭州四季青生物公司产品;一氧化氮清除剂c-PTIO(2-(4-carboxyphenyl)-4，4，5，5-tetramathylimidazoline-1-oxyl-3-oxide)、二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(MTT)、Hoecheste 33258 和PI购自Sigma公司。FITC-AnnexinⅤ/PI细胞凋亡检测试剂盒购于美国Bender公司;可见光法测丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)含量，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、过氧化氢酶(catalase，CAT)活力测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。……