王 萍，刘云会，薛一雪

(1.中国医科大学基础医学院神经生物学教研室，辽宁沈阳 110001;2.中国医科大学附属盛京医院，辽宁沈阳 110004)

脑肿瘤是一种严重危害人类健康的疾病，手术切除结合术后化疗能有效延长患者的生存期。然而，由于血肿瘤屏障的存在极大的限制了抗肿瘤药物进入中枢神经系统，影响化疗疗效，如何安全有效的增加血肿瘤屏障的通透性是目前亟待解决的关键问题［1］。交叉反应物质 197(cross-reacting material 197，CRM197)是一类白喉毒素的无毒突变体，作为荚膜多糖抗原载体蛋白或疫苗在国外已尝试应用于临床［2-3］。CRM197的主要作用位点是白喉毒素受体，也称肝素结合表皮生长因子(heparin-binding epidermal growth factor，HB-EGF)的膜结合前体。CRM197与受体结合后可以抑制受体剪切，明显减少剪切后HB-EGF的形成，减弱由HB-EGF激活的多条信号途径，如 PI3K/Akt信号途径。因此，CRM197还具有抗癌的作用，可用于卵巢癌等HBEGF高表达的癌症的治疗［4-5］。最近有研究发现［6］，CRM197可以作为一种安全有效的载体，转运大分子物质通过血脑屏障，提示CRM197有可能成为新的更为有效的脑内药物转运载体。对于CRM197转运大分子物质通过血肿瘤屏障的作用效果及相关机制目前尚未见报道。本研究通过检测分析CRM197转运HRP通过血肿瘤屏障的效果以及对p-Akt、转录因子FOXO1A及质膜微囊蛋白caveolin-1表达水平的影响，旨在为CRM197的临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1试剂和仪器CRM197、牛血清白蛋白购自Sigma公司;HRP偶联试剂盒购自Alpha Diagnostic公司;EGM-2 MV细胞培养液购自Lonza公司;兔抗p-FOXO1A(Ser256)多克隆抗体购自Abcam公司;兔抗p-Akt 1/2/3(Ser473)多克隆抗体、羊抗Akt 1/2多克隆抗体、兔抗caveolin-1多克隆抗体、小鼠抗β-actin单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的二抗和ECL化学发光检测试剂盒均购自Santa Cruz公司;SP试剂盒购自福建迈新生物技术公司。……