龚 敏，梁鑫淼，崔晓楠

(1.大连医科大学附属第一医院肿瘤科，辽宁 大连 116011;2.中科院大连化学物理研究所，辽宁 大连 116023)

目前化疗药物对肝癌有效率不超过20%［1］。靶向药物，如sorofenib、erlotinib等未能改变肝癌治疗现状［2］。因而探索高效低毒的抗肝癌药物历来是医学关注的热点。榄香烯(elemene，ELE)是从活血化瘀中药姜科植物温莪术中提取出的抗癌活性单体，研究表明 ELE对多种肿瘤具有抑制作用［3－5］，表现出高效低毒的中药特质，尤其对肝癌显示出良好临床疗效［7］。然而，其机制有待深入研究。TOPOⅠ、TOPOⅡ是调节核酸拓扑构型的关键酶，已成为抗癌药物研究的重要靶点之一［9］，目前关于ELE对TOPOⅠ、TOPOⅡ的作用机制未见报道。本研究观察了ELE对人肝癌HepG-2细胞增殖、细胞凋亡及TOPOⅠ、TOPOⅡ表达的影响。

1 材料与方法

1.1材料人肝癌细胞株HepG-2(大连医科大学附属第一医院中心实验室传代、保存);ELE(大连金港制药有限公司，批号0508031);MTT(Biosharp公司);AnnexinV试剂盒(美国Molecular Probes公司);RT-PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司);PCR扩增引物(由大连宝生物工程有限公司合成);碘化丙啶(Sigma公司);溴化乙锭(Amresco公司);TRIzol试剂盒(Invitrogen公司);氯仿、异丙醇、乙醇(均为国产分析纯);十二烷基硫酸钠、四甲基乙二胺、丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺(美国Sigma公司);甘氨酸(上海生工生物工程技术有限公司);1 mol·L－1Tris(pH 6.8)、1.5 mol·L－1Tris(pH 8.8)和超敏ECL化学发光试剂盒(碧云天生物技术研究所);蛋白质定量试剂盒(BCA法)(凯基生物有限公司);兔抗人TOPOⅠ多克隆抗体(sc-10783)，兔抗人TOPOⅡ多克隆抗体(sc-13059)(Santa Cruz公司);辣根酶标记山羊抗兔IgGⅡ抗(河北博海生物工程有限公司)。

1.2细胞培养将HepG-2细胞接种于含10%新生牛血清的低糖IMDM培养基中。……