方伟达 梁文勇 余其昌

鼻咽癌是我国肿瘤疾病中的常见病，且占头颈部肿瘤发病率的首位。nm23蛋白属于肿瘤转移抑制基因，其表达的减少可以导致肿瘤的转移；增殖细胞核抗原( proliferating cell nuclear antigen,PCNA)可以反映细胞的增殖状况。我们通过免疫组织化学技术检测nm23蛋白和PCNA在鼻咽癌组织中的表达,初步分析其表达结果与鼻咽癌浸润转移、恶性程度及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 材料来源

收集我院2006年9月～2007年11月经病理检查确诊的66例鼻咽癌患者的资料。所有患者均未经放射及化学药物治疗，并有完整临床及随访资料,其中男性48例,女性18例,年龄18～73岁,中位年龄为48岁。同时选择该期间病理诊断为慢性鼻咽炎患者32例作为对照组。

1.2 免疫组化染色

免疫组化染色采用SP法,第一抗体nm23蛋白和PCNA以及SP试剂盒均购自福州迈新公司,抗体均为即用型。所有标本均经10%中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋,切片,行HE染色和免疫组化染色。用已知阳性片做阳性对照,用PBS液代替一抗做阴性对照。按照说明书进行操作。

1.3 结果判定

nm23蛋白表达主要位于胞质内,胞膜及胞核内可见少量弱阳性表达；PCNA以细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性细胞;在400倍显微镜下计数5个随机视野,取平均值,分别记为:阳性细胞数≤5%为“-”；5%<阳性细胞数≤25%为“+”； 25%<阳性细胞数≤50%为“++”；阳性细胞数> 50%为“+++”。

1.4 统计学处理

采用SPSS 11.5统计软件进行分析。标本均数间比较采用t检验，率的比较采用 χ2检验。

2 结果

2.1 鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎中nm23蛋白和PCNA的表达

nm23蛋白在鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎中的阳性率分别为66.7%(44/66)、21.9%(7/32)，差异有统计学意义(P<0.05)。PCNA在鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎组织中的阳性表达率分别为60.6%(40/66)、12.5%(4/32)，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 鼻咽部不同病变组织nm23蛋白和PCNA的表达情况(例)

2.2 鼻咽癌转移组和非转移组中nm23蛋白和PCNA的表达

nm23蛋白在鼻咽癌转移组和非转移组中的阳性率为21.4%，83.3%，两者差异有统计学意义；PCNA在鼻咽癌转移组和非转移组中的阳性率为78.6%，25.0%，两者差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 鼻咽癌转移和非转移组PCNA和nm23蛋白的表达情况(例)

2.3 鼻咽癌组织中nm23蛋白和PCNA的表达相关性

在 66例鼻咽癌中，nm23蛋白和PCNA相互间无明显的关联性，见表3。

表3 nm23蛋白和PCNA在鼻咽癌的表达关系 (例)

3 讨论

nm23基因最先是1988年在美国国立癌症研究所从鼠黑色素瘤细胞系cDNA 基因文库中分离鉴定出来的抗转移癌基因,因为在低转移细胞株中nm23 基因的表达强度是高转移细胞株的10 倍,这就表明nm23 基因可能与肿瘤的转移抑制有关。nm23 基因的蛋白产物是NDPK,它为正常组织发育所必需，nm23蛋白的点突变、等位基因丢失均可使nm23蛋白失活或者减少,导致1种有利于畸形分化的紊乱状态，进而丧失对肿瘤转移的抑制功能，同时nm23 基因表达低调节时,提示预后较差。本组实验结果显示,鼻咽癌组织中nm23 蛋白的阳性表达率与慢性鼻咽炎比较有显著性差异；nm23蛋白在鼻咽癌转移组中低表达,说明nm23 低表达减弱了抑制肿瘤转移的能力，故可将检测nm23 的表达作为预测鼻咽癌转移情况的1项较好指标。

增殖细胞核抗原(PCNA)又称周期素,作为DNA 聚合酶辅助蛋白，其表达和合成与细胞增殖周期相关。细胞增殖率可反应肿瘤的生物学活性，细胞过度增殖可能导致肿瘤的发生，因此肿瘤细胞增殖水平反映了肿瘤的恶性程度。PCNA 的表达可以反映细胞的增殖活性，所以检测细胞PCNA已广泛应用于判断各种肿瘤疾病的恶性程度。王书芹等[1]研究鼻咽癌组织中PCNA 的表达时发现,PCNA 高表达者较易发生转移,但PCNA 的表达与患者的生存期无关。而吴又明等[2]研究认为,PCNA 高表达者较易发生转移,并且PCNA 高表达者生存期较长,原因是PCNA 高表达者细胞增殖速度快,对放疗敏感性强,放疗效果好。本研究发现,鼻咽癌组织中PCNA的阳性表达率与慢性鼻咽炎比较有显著性差异，这与朱秀梅等[3]的研究结果相符。PCNA在鼻咽癌转移组中的比例低于非转移组，此观点与上面学者的观点有相同之处。本研究结果表明PCNA的表达与鼻咽癌的恶性程度和高转移能力相关,是评价鼻咽癌有价值的指标。本实验表明nm23蛋白和PCNA两者间并没有明显的相关性，这是否与样本量较少有关还有待于进一步探讨。

总之，我们认为,nm23蛋白和PCNA均能各自很好地反映鼻咽癌的恶性程度和转移性，并能作为预测鼻咽癌转移情况的1项较好的参考指标。

[1] 王书芹,周小军,禤瑞霞.鼻咽癌组织中PCNA 和P16 的表达及意义〔J〕.中华临床医学杂志,2004,5(4) :31.

[2] 吴又明,储 兵.nm23、P53、PCNA 的表达与鼻咽癌转移预后关系的研究〔J〕.诊断病理学杂志,2000,7(3) :204.

[3] 朱秀梅，钟良清.MCM5和PCNA在鼻咽低分化鳞癌中的表达及意义〔J〕.中国当代医药，2009,9(16)：36.