张丹丹 张玉泉 季玉琴 周业娣 糜媛媛

近年来，有研究表明HPV的E6、E7编码蛋白，通过不同的泛素-蛋白酶体途径导致宫颈细胞癌变，其中HPV E6-E6AP-P53途径是目前研究最多的途径，已能在体外完全模拟建。

泛素-蛋白酶体途径作为HPV导致宫颈癌的重要机制，研究该途径的抑制剂对宫颈癌的治疗可能产生巨大影响，硼替佐米(bortezomib,PS-341)是首个被用于临床的蛋白酶体抑制剂。本实验旨在观察PS-341对宫颈癌细胞株SiHa细胞毒性影响的研究，为临床治疗提供有力证据。

1 材料与方法

1.1 细胞株及培养

人类宫颈癌SiHa细胞株，购于上海拜力生物科技有限公司。购买的人宫颈癌SiHa细胞株接种在25 cm2的培养瓶中，包装无破损，镜下观察形态正常，放量37℃、5%CO2培养箱中常规培养。用含10%胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)的DMEM完全培养液(南京基然生物科技发展有限公司)培养，0.25%胰酶(南京基然生物科技发展有限公司)消化传代。

1.2 药物及试剂

注射用硼替佐米(万珂)，美国Ben Venue Laboratories Inc.生产，西安扬森制药有限公司分装，进口药品注册证号：H20050308，分装批准文号：国药准字J20050042。购于南京众协药房有限公司，用无菌水稀释成1 mg/ml备用。Hoechst染色试剂盒购于海门碧云天生物科技研究所，Annexin-V FITC kit试剂盒和细胞DNA(细胞周期)检测试剂盒，均购于南京凯基生物科技发展有限公司。

1.3 Hoechst染色检测细胞凋亡

将干净无菌的盖玻片置于6孔板内,接种细胞过夜。当细胞铺满盖玻片50%～80%时,依次加入0 nmol/L、20 nmol/L 、40 nmol/L 、60 nmol/L PS-341，分别作用24、48、72 h后,吸尽培养液,加入0.15 ml的固定液,固定过夜。去固定液,用PBS 洗2 遍,每次3 min,吸尽液体,加入0.5 ml Hoechst染色液,避光染色5 min,晃动数次,封片,荧光显微镜下观察。……