李宝江 姜忠敏 张立东 张 亮 郑 末

胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)是常见的消化道间叶源性肿瘤，其良、恶性在临床依然很难准确界定[1]。目前主要根据GIST肿瘤体积大小和核分裂像的多少判断肿瘤恶性行为，然而近来发现直径很小的GIST也可能发生浸润和转移，一旦发生瘤细胞转移，患者的预后极差。因此，寻找特异性标记物来准确地预测肿瘤生物学行为及患者预后显得十分重要。

研究证实，在多数肿瘤中maspin蛋白表达下调或缺失可促进癌细胞的浸润和转移，预示患者预后不良，因此，被认为是1种潜在的抑癌基因[2,3]。目前有关maspin在GIST中的研究相对较少，本文通过检测maspin蛋白在GIST中的表达，分析其与GIST生物学行为、患者预后及p53表达的相关关系，以探讨maspin基因在GIST发生、发展和侵袭、转移中的作用及其相关的分子病理学机制。

1 材料与方法

1.1 材料

选择2000年1月至2010年3月、天津市第五中心医院病理科收集的54例胃肠道间叶源性肿瘤的蜡块，根据光镜下组织形态学特点及CD117、CD34、SMA、Desmin及S-100蛋白免疫组织化学染色结果确诊为GIST 42例。所有病例均经病理医生复查，HE染色进行以下几个方面特征评估：组织学类型、坏死、核分裂像(在 ×400倍下观察50个视野)等。

1.2 主要试剂

鼠抗人maspin单克隆抗体和鼠抗人p53单克隆抗体购自英国Nevomarkers公司；Envision试剂盒及氨基联苯胺(DAB)试剂盒购自美国Dako公司。

1.3 方法

1.3.1 免疫组织化学染色 采用Envison两步法：取上述存档的石蜡组织块，连续组织切片，厚4 μm，常规 HE 染色及免疫组织化学染色。免疫组织化学染色按试剂盒说明书进行操作，maspin抗体稀释度为1∶500，p53抗体稀释度为1∶200。用已知阳性片和 PBS 代替一抗分别作为阳性和阴性对照。

1.3.2 结果判断标准 Maspin以胞质和(或)胞核内出现明显的黄色或棕黄色颗粒为阳性染色；p53以胞核内出现明显的黄色或棕黄色颗粒为阳性染色。两名病理医师独立观察，选染色均匀肿瘤区10个高倍视野，以阳性细胞率进行判断。阳性细胞率<20%为阴性(-)，20%～40%为弱阳性(+)，41%～59%为阳性(++)，≥60%为强阳性(+++)。

1.4 统计学方法

应用SPSS 11.5统计软件，采用χ2检验及spearman等级相关分析，对随访资料进行Kaplan-Meier生存分析，采用log-rank检验进行组间生存率比较。

1.5 随访及生存分析

对所有病例进行后期随访，并进行生存状态分析。

2 结果

2.1 临床资料

本组54例，确诊GIST 42例。男性23例，女性19例；年龄26～75岁，中位年龄53岁；肿瘤部位：胃21例，小肠13例，大肠6例，胃肠道外2例；组织学类型：梭形细胞型25例，上皮样细胞型7例，混合细胞型10例。按Flecher分级法将42例GIST分为3组：极低和低度侵袭危险性11例，中度侵袭危险性19例，高度侵袭危险性12例。

2.2 maspin蛋白表达与GIST临床病理特征的关系

42例GIST中，maspin阳性表达率为64.3%(26/42)，不同性别、年龄、肿瘤部位和组织学类型间比较，maspin表达差异无显著性(P>0.05)；在不同侵袭危险性GIST中maspin表达有显著性差异(P<0.05)，见表1。

2.3 maspin与p53蛋白表达的相关性

42例GIST中，p53蛋白阳性表达率为69.0%(29/42)。Maspin表达与p53表达的相关性见表2，经Spearman等级相关分析，maspin表达与p53蛋白表达呈负相关性(P<0.01)。

表1 maspin表达与GIST临床病理特征的关系(例，%)

表2 GIST组织中maspin表达与p53表达的相关性

2.4 随访结果

42例GIST患者中28例获随访，随访率为66.7%，随访时间为3～98个月，平均随访时间为32个月。maspin蛋白表达与GIST患者生存期呈负相关性(P<0.05)，并作出Kaplan-Meier曲线，见图1。

图1 Kaplan-Meier生存曲线

3 讨论

Maspin基因属于丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin超家族成员之一，最初由Zou等[4]在1994年用消减杂交技术对正常乳腺组织和乳腺癌组织进行比较时发现。研究表明，maspin蛋白在多数正常人体器官组织中有不同程度的表达，而在相应的恶性肿瘤中表达下调或不表达。进一步研究发现在多种肿瘤中，maspin在抑制肿瘤细胞的运动、增殖、肿瘤新生血管生成和诱导细胞凋亡等方面都起着重要作用，可以作为肿瘤转移及预后评估的一个重要指标[5]。Sood等[6]研究表明，maspin蛋白在卵巢癌中过度表达，而且maspin蛋白的过表达与较高的肿瘤分级和总的生存期较短有关。以往关于maspin的报道多为上皮肿瘤，在间质肿瘤中的研究报道较少。Saduman等[7]通过免疫组织化学检测maspin在GIST中的表达情况，研究发现其平均表达率为66.6%，在高危险组中的表达显著低于中危险组和低危险组。该实验结果与maspin的肿瘤抑制功能是一致的。本实验结果发现maspin表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、组织学类型无显著相关；与肿瘤侵袭危险性呈显著负相关，随着侵袭危险性的增加，maspin表达显著降低；与患者预后呈显著正相关，其表达越低，患者的预后越差。该结果提示maspin可能是GIST发生发展过程中的一个重要抑制因子，该结果与Saduman的研究结果基本一致。

p53基因是肿瘤抑癌基因之一，当野生型p53突变时不仅失去了抑制癌变功能，还促使正常细胞向癌细胞转化。体外研究发现，maspin表达受野生型p53的直接调节：maspin启动子上游存在p53结合位点，当野生型p53结合到maspin启动子的p53结合位点后能刺激组蛋白的乙酰化、增加启动区染色质的可进入性，并通过影响maspin的甲基化抑制屏障而激活maspin的启动子。当野生型p53基因突变时，p53就失去了刺激maspin基因转录的功能[8,9]。Soog等[10，11]研究了p53与maspin在结肠、胃癌和前列腺中的表达相关性，结果表明maspin的表达与野生型p53水平呈正相关，与突变型p53水平呈负相关，提示maspin可能是体内p53的作用靶基因。此外，DNA破坏性物质和细胞毒性药物能诱导野生型p53基因在肿瘤细胞表达内源性的maspin，但是对于含有突变型的p53细胞则没有此作用。本实验结果表明maspin与突变型p53表达呈显著负相关，与maspin在大部分上皮源性肿瘤的表达规律基本一致。提示maspin的抑癌功能可能与p53抑癌通路密切相关；maspin表达下调促使GIST演进也可能与p53基因突变有关，具体机制尚需要进一步的实验验证。

综上所述，maspin的单独检测或与p53联合应用，有望为未来评定GIST的生物学行为及预测患者预后方面，提供一定的实验依据。

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[4] Zou Z，Anisowicz A，Hendrix MJ，et al.Maspin，a serpin with tumor suppression activeity in human mmmnary epithedial cells〔J〕.Sci,1994,63:329.

[5] Tsuji T,Togami S,Douchi T,et al.Difference in subcellular localization of maspin expression in ovarian mucinous borderline tumour〔J〕.Histopathology,2009,55(1):130.

[6] Sood AK，Fletcher MS，Gruman LM，et al.The paradoxical expression of maspin in ovarian carcinoma〔J〕.Clin cKncer Res,2002,8:2924.

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