韩彬，程道梅，余小平＊，彭晓莉，贾皓

（1.遵义医学院公共卫生学院，贵州 遵义 563003；2.成都医学院公共卫生系，四川 成都 610083）

血管生成对实体瘤的生长、浸润和转移至关重要，血管内皮细胞（ECs）的活化和肿瘤细胞直接参与 实 体 肿 瘤 的 血 管 生 成［1－3］。 染 料 木 黄 酮（genistein，Gen）是一种重要的非营养素，属于异黄酮类，主要存在于大豆及其制品中。目前，针对Gen的功效研究主要集中于肿瘤、心血管疾病和女性绝经综合征的化学预防［4］。前期研究显示，Gen在体内外均可通过抑制HER－2／neu受体磷酸化和蛋白激酶K（PTK）活性［5］下调促血管生成因子的表达，但有关Gen抗血管生成作用的分子机制仍不十分清楚。ECs参与实体肿瘤的血管生成［6］，本研究旨在评估Gen对血管内皮生长因子（VEGF）诱导的ECs活化的影响，揭示Gen抗血管生成的可能分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料

染料木黄酮、VEGF购自北京Yahui生物医学工程公司；PTK活性分析试剂盒、Caspase－3活性分析试剂盒、Annexin V－FITC凋亡试剂盒购自美国Promega公司；特级胎牛血清购自Hyclone公司；ECs生长添加剂ECGS、抗体F－3520购自美国Sigma公司；RPMI 1640培养基购自美国Invitrogen公司。

1.2 方法

1.2.1 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）培养和处理收集健康非异常妊娠母亲经阴道所产健康胎儿的新鲜脐带，分离 HUVECs，在含有20%特级胎牛血清、100U／ml盘 尼 西 林、100μg／ml链 霉 素 和75μg／ml ECGS的RPMI1640培养液中，37℃，5%CO2条件下培养。根据鹅卵石样形态以及免疫细胞化学方法（ECs特异抗体，F－3520）鉴定为ECs。将第3～6代的细胞接种于24孔板，分别用5μg／ml VEGF单独处理或VEGF（5μg／ml）外加1、10、100μmol／L Gen处理24h。用等量的二甲基亚枫（DMSO）替代VEGF和（或）Gen处理作为对照组。细胞培养基中DMSO的终浓度≤0.1%（v／v）。

1.2.2 细胞凋亡和死亡分析 采用Caspase－3活性分析试剂盒和Annexin V－FITC凋亡试剂盒对凋亡情况进行定量分析，通过锥虫蓝不相容试验对HUVECs的细胞毒性和死亡情况进行量化分析。……