何正光，陈 刚，祝慧凤，叶 兰，徐晓玉

(1.重庆师范大学医院，重庆 400047;2.重庆工商大学药物研究中心，重庆 400067;3.西南大学药学院/重庆市药效评价工程技术研究中心，重庆 400716;4.贵阳医学院药学院，贵州贵阳 550004)

脑梗死是中老年高发病，脑梗死后缺血区微血管受损，缺失［1］。葛根素注射液临床上广泛用于脑缺血，疗效明显。对血管内皮细胞有促增殖，抑钙超载，抗氧化等作用［2］，对脑缺血有明显的保护作用。本实验用大鼠脑缺血/再灌注(ischemia-reperfusion，CIR)模型，从促血管新生角度探讨葛根素治疗脑缺血的机制，观察其时效、量效关系。

1 材料与方法

1.1动物♂ SD大鼠，体重质量(250±30)g，重庆医科大学动物中心提供。合格证:SCXK(渝)20020003。

1.2药品与试剂葛根素注射液，规格:2 ml:葛根素100 mg，批号20040601，江西银涛药业有限公司。Ⅷ因子抗体，北京中杉金桥生物技术有限公司;VEGF抗体、Angiopoietin-1抗体、Angiopoietin-2抗体、VEGF原位杂交试剂盒，武汉博士德生物工程有限公司。

1.3模型制备、不纳入标准及分组按李琴［3］等的方法，线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血模型，缺血2 h后再灌注。不纳入标准:评分低于2分;蛛网膜下腔出血;HE染色无缺血病理改变;未到时相点死亡。每组各6只，随机分为 12 组:0 h CIR:108、54、27 mg·kg－1;24 h CIR:108、54、27 mg·kg－1;48 h CIR:108、54、27 mg·kg－1。

1.4给药及取材给予葛根素腹腔注射，每天1次，连续7 d。模型组给同容积的50%丙二醇。动物达到时相点后，用恒流泵经心脏灌注含0.1%DEPC多聚甲醛固定。立刻取脑，作前脑视神经交叉处2 mm厚冠状切片。

1.5检测

1.5.1神经行为学评分动物处死前，参照Zea Longa 5分制标准对神经功能评分。

1.5.2免疫组化检测VEGF、Ang-1、Ang-2蛋白及MVD，原位杂交检测VEGF mRNA 用Image proplus 5.0进行光密度(IOD)分析。……