翟羽佳，陈邦添，李善兵，李怡芳，谢 果，何蓉蓉，栗原博

(暨南大学中药及天然药物研究所，广东广州 510632)

由于高脂血症可诱发心脑血管等多种相关疾病，因此人们十分关注对其治疗药物的研发和药效评价方法的建立。表面活性剂Triton WR-1339(tyloxapol)诱发动物高脂血症模型，具有操作简便且药效评价快速等特点而被广泛运用。本实验从基因水平探讨Triton WR-1339诱发高脂血症的机制，旨在为该模型用于降血脂药物筛选和药效评价提供有益的实验依据。

1 材料与方法

1.1材料7周龄♂清洁级昆明种小鼠购自广东省医学实验动物中心，许可证号:SCXK(粤)2008-0002。Triton WR-1339购自美国 Sigma公司，TC、TG、LDL-C、LPL、HTGL 及考马斯亮蓝蛋白试剂盒均购于南京建成生物科技有限公司(批 号分 别 为:20100527、20100527、20100517、20100719、20100705)，引物由美国Invitrogen(上海)英骏生物技术有限公司合成。

1.2Triton WR-1339诱发小鼠高脂血症将小鼠随机分为正常对照组与Triton WR-1339模型组，每组10只。模型组300 mg·kg－1剂量尾静脉注射Triton WR-1339造模，对照组注射等量生理盐水。造模18 h后，小鼠乙醚麻醉下经心脏取血并加肝素抗凝，同时取出小鼠肝脏后冷藏备用。

1.3血浆TG、TC及LDL-C水平测定全血于4℃，2 000 r·min－1离心10 min分离血浆，按试剂盒说明书检测血浆TG、TC及LDL-C的水平。

1.4肝组织LPL、HTGL活性及mRNA表达水平的测定将肝脏用生理盐水制成10%的组织匀浆液，3 000 r·min－1离心10 min后，取上清按试剂盒说明书测定肝组织LPL及HTGL的活性。用TRIzol法提取肝组织总 RNA，取1 μg总RNA合成cDNA后进行PCR反应。LPL引物序列为(F)5'-CTAACTGCCACTTCAACC-3'和(R)5'-CAGACTTCCTGCTACGC-3'，扩增片段320 bp。HTGL引物序列为(F)5'-TGGACGGGAAGAACAAG-3'和(R)5'-GGAGTCAATGAAGAGGTGC-3'，扩增片段 326 bp。18S引物序列为(F)5'-GGGAGAGCGGGTAAGAGA-3'和(R)5'-ACAGGACTAGGCGGAACA-3'，扩增片段241 bp。取6 μl PCR反应产物进行1%琼脂糖凝胶电泳分离，采用Quantity One图像分析软件分析数据，以目的条带与18S的灰度比值进行半定量分析。……