夏 维，王修珍，蒋小岗，顾振纶，郭次仪

(1.苏州中药研究所，2.苏州大学医学部病理学与病理生理学系，江苏苏州 215123)

蓝萼甲素(Glaucocalyxin A)是由唇形科香茶菜属植物香茶菜Rabdosia amethystoieds(Benth)Ham中分离提取出的二萜化合物［1］。研究证明不同浓度的蓝萼甲素可抑制某些肿瘤细胞的增殖，如肝癌 BEL-7402细胞株［2］、卵巢癌HO8910细胞株［3］，然而，蓝萼甲素抑制肿瘤细胞增殖的机制尚未阐明。本文研究了蓝萼甲素对人宫颈鳞癌SiHa细胞凋亡及其生长抑制作用，并初步探讨其机制。

1 材料与方法

1.1材料蓝萼甲素，上海艾汇生物科技有限公司(纯度≥99.7%，批号:20100513)，溶于 DMSO 中配成50 mmol·L－1的母液;人宫颈鳞癌SiHa细胞株，中国科学院上海细胞生物学研究所。MEM培养基、胎牛血清(Hyclone)，MTT(噻唑蓝)、DMSO(二甲基亚砜)、PI(碘化丙啶)、RNA 酶(Sigma公司)，Hoechst 33258染色试剂盒(上海碧云天生物公司)。

1.2方法

1.2.1细胞增殖抑制测定采用 MTT法检测不同浓度的蓝萼甲素(1.25、2.5、5、10、20 μmol·L－1)对 SiHa 细胞的毒性作用，570 nm处测吸光度值，实验重复3次。

1.2.2Hoechst 33258染色法取对数生长期细胞，接种于24孔板中，次日待细胞贴壁后给予蓝萼甲素浓度分别为2.5、5、10 μmol·L－1，对照组加新鲜培养基，培养 24 h 后按试剂盒操作步骤进行，荧光显微镜观察、摄影。

1.2.3流式细胞仪检测细胞周期改变及凋亡率蓝萼甲素处理细胞24 h后收集细胞，体积分数为70%的乙醇固定过夜，加入PI染色和RNA酶，37℃水浴30 min，用流式细胞仪检测。

1.2.4RT-PCR检测bax、bcl-2、caspase-3、caspase-9 mRNA表达应用Biozol体系，根据说明书步骤进行RNA提取。按TaKaRa试剂盒逆转录mRNA为cDNA。以GAPDH作为内参，以PCR仪进行扩增。引物由上海生工生物技术有限公司合成。PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。

1.2.5统计学处理实验数据采用SPSS12.0统计软件处理，多组比较采用方差分析法，实验结果用±s表示。……