马武开，李玉莹，姚血明，王 莹，黄礼明

(贵阳中医学院第二附属医院血液风湿科，贵州贵阳 550003)

在白血病细胞的耐药机制中，核周因子NF-κB与肿瘤细胞的发生、增殖、分化、凋亡及耐药有密切关系，是多药耐药(multidrug resistance，MDR1)信号转导途径中的主要信号分子，在白血病细胞表达与耐药有关的因素中可能起关键的调控作用。本研究采用血清药理学方法和分子生物学技术研究解毒化瘀药含药血清对人白血病耐药细胞系K562/A02细胞NF-κB信号的影响，探讨解毒化瘀药对K562/A02耐药逆转机制。

1 材料与方法

1.1解毒化瘀方含药血清的制备［1］新西兰大白兔10只灌服解毒化瘀方水煎液(药物由青黛、山慈姑、蚤休、虎杖、莪术、川芎、丹参、补骨脂等组成，按高剂量12 g生药·kg－1灌服，即正常成人用量的2倍)，每日1次，连续3 d，于末次给药后2 h无菌条件下心脏取血，分离血清，组内血清混合，用0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，置－20℃保存备用。正常兔血清制备:灌药前1 d取兔血，分离血清，方法同前。

1.2主要试剂和仪器主要试剂:RPMI 1640培养粉(Gibco)、胎牛血清(杭州四季青)、RT-PCR试剂盒(南京凯基生物科技)。主要仪器:PCR梯度循环仪(美国)、紫外可见分光光度计(日本岛津)、凝胶成像分析系统(GE Healthcare)。

1.3 含药血清的细胞毒作用将K562、K562/A02细胞悬液1 ×109·L－1加入 96 孔板中，每孔 100 μl，适应性的培养12 h，实验组用各浓度含药血清培养(共10个浓度)，以不含药正常培养的K562和K562/AO2细胞为对照组，另外设调零孔，最终每孔为200 μl。37℃，5%CO2孵育 48 h，每孔加入5 g·L－1的MTT磷酸缓冲液20 μl，在同样条件下继续培养 4 h，离心(1 000 r·min－1，5min)，弃上清，每孔加 DMSO 150 μl，振荡10 min，使结晶物充分溶解，用酶标仪检测，计算各组细胞毒性。……