于 艳,张安玲

(1.吉林医药学院附属医院口腔科,吉林吉林市132011;2.吉林大学第四医院口腔科)

口腔鳞状细胞癌其患病率和死亡率较高,而浸润和转移是造成其不良预后的主要因素,早期诊断非常重要。研究表明[1],基质金属蛋白酶2(MMP-2)在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用。本研究对50例口腔鳞癌中MMP-2表达进行研究,为临床早期诊断提供依据。

1 材料和方法

1.1 一般资料

收集2008年1月至2010年1月在吉林医药学院附属医院口腔科手术切除经病理诊断确诊的口腔鳞状细胞癌归档蜡块50例,男28例,女22例,具有完整的病史、病理数据,术前均未接受过放化疗治疗。患者年龄38-80岁,平均年龄45.5岁。经颈淋巴结清扫术证实伴淋巴结转移者24例,无淋巴结转移者26例;按TNM分期,Ⅰ+Ⅱ期患者20例,Ⅲ+Ⅳ期患者30例。鳞癌分化程度:低分化10例,中分化25例,高分化15例。正常口腔黏膜组织标本20例做对照(经H E染色证实)。

1.2 实验方法

将10%福尔马林固定、石蜡包埋的组织蜡块进行常规切片,经免疫组化染色,石蜡切片脱蜡水化,根据每一种抗体的要求,对组织抗原进行相应的修复。将切片浸入0.01 M(pH6.0)枸橼酸盐缓冲液,微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10 min后,反复1-2次,冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。用已知的阳性的口腔癌切片作阳性对照,用已知的阴性的口腔癌切片作阴性对照,以PBS缓冲液代替一抗作空白对照。

1.3 结果判定标准

由两位病理医师对免疫组化染色分别进行半定量计数。MMP-2蛋白的阳性结果判定:MMP-2蛋白主要表达在肿瘤细胞膜或胞浆,呈棕黄色颗粒,以染色强度与阳性细胞的百分比乘积作为半定量标准[2]。染色强度:未着色0分,淡黄色1分,棕黄色2分,棕褐色3分;阳性细胞百分数＜5%为0分,5%-25%为1分,26%-50%为2分,＞50%为3分,二者乘积＞l视为阳性。

1.4 统计学分析

用SPSS 17.0统计分析软件进行分析,口腔鳞癌MMP-2的表达与临床病理特征的关系采用 χ2检验,统计学检验以P＜0.05为差异有显著性。

2 结果

MMP-2在口腔鳞癌组织中呈高表达,阳性表达率为66.00%,口腔正常黏膜组织的阳性表达率为25.00%,二者相比有显著差异(P＜0.01);肿瘤不同分化程度间MMP-2表达率无显著性差异(P＞0.05);在TNMⅠ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期的表达率无显著性差异(P＞0.05);MMP-2的表达与淋巴结转移密切相关,有淋巴结转移组和无淋巴结转移组MMP-2阳性表达率相比有显著性差异(P＜0.05)。(详见表1)。

表1 MMP-2在口腔鳞癌中的表达与临床病理特征之间的关系

3 讨论

口腔鳞状细胞癌的生长、侵袭和转移是一个多阶段、多水平、多因素的过程,关键是降解肿瘤周围的基质。实验证明[3],瘤细胞侵袭转移能力与其诱导产生蛋白酶、降解细胞外基质、基底膜的能力密切相关。首先是肿瘤细胞降解细胞外基质和基底膜,其主要步骤包括瘤细胞穿过ECM屏障、血管壁的基底膜及穿出血管壁进入宿主微循环。对ECM的降解必须有蛋白水解酶的激活和参与,ECM降解酶主要分为三大类[4]:丝蛋白酶、半胱氨酸酶、MMPs,其中MMPs是近年来在研究细胞外基质合成与降解平衡的一组酶,几乎能降解细胞外所有成分 ,在转移癌中明显高表达。基质金属蛋白-2(MMP-2)基因位于人类染色体16q21,由13个外显子和12个内含子组成,结构基因总长度为27kb,MMP-2是一种非糖化的明胶酶,分子量为72 KD,属于膜型基质金属蛋白酶类,是MMPs家族中的一个亚家族。在肿瘤细胞侵袭过程中,活化的MMP-2是定位细胞穿透基质的突出部位,具有“钻头”样作用[5]。存在于肿瘤细胞表面的MMP-2能使这些肿瘤细胞降解其下面的基底膜,穿透基质并发生转移。大量实验证明[6]MMP-2在人类多数肿瘤组织及其转移灶中高度表达,并且在癌细胞脱落、游走、浸润转移过程中起着相当重要的作用。本研究发现口腔鳞癌织中MMP-2表达率66.00%,显著高于正常口腔黏膜组织,癌巢周围的肿瘤细胞阳性表达水平更高,说明癌巢周边的肿瘤细胞可以分泌更多的MMP-2。本实验结果还显示,在口腔鳞癌组织中MMP-2高表达与口腔鳞癌病理分级和临床分期无关,在淋巴结转移阳性组中,MMP-2的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组,提示MMP-2在口腔鳞癌的浸润转移可能起着促进作用。

综上所述,基质金属蛋白-2与口腔鳞癌的侵袭转移的关系,已为我们认识肿瘤进程的机理提供了有力的依据,随着这一领域研究的深入,将为临床肿瘤的诊断预防提供可信的指标,也为临床治疗肿瘤提供新的策略与方向,为口腔鳞癌早期诊断、治疗及预后的评价提供重要的帮助。

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