王 爽,齐 玲,金 宏,张以忠,曹志友

(1.吉林医药学院 实验中心,吉林 吉林市132013;2.吉林医药学院直属医院)

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)在肿瘤的免疫监视中起到一定作用。rhTRAIL可诱导肿瘤细胞凋亡。研究表明,大多数非小细胞肺癌细胞株对TRAIL抵抗[1],因此,我们研究化疗药物与TRAIL联合作用对非小细胞肺癌细胞的作用机制。

1 材料与方法

1.1 细胞 非小细胞肺癌A549细胞株由吉林医药学院实验中心提供。

1.2 主要试剂 rhTRAIL(Peprotech公司),RPMI 1640细胞培养液、小牛血清(GIBCO公司),顺铂、放线菌素D及对硝基苯(上海生物工程技术公司)。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养 复苏A549细胞,用含10%血清的RPMI 1640培养液,置于培养箱中,37℃,5%CO2,饱和湿度下培养,隔日换液,1∶3传代。

1.3.2 TRAIL联合化疗药物对A549细胞增殖的影响 细胞融合至85%,胰酶消化,计数活细胞,以每孔8×103个细胞接种于 96孔板中,培养24 h,将细胞分为4组,分别加入TRAIL 100 ng/ml,TRAIL 100 ng/ml与顺铂10 μ g/ml,TRAIL 100ng/ml与放线菌素D10 ng/ml联合,对照组使用基础培养基。作用24 h后,小心弃上清,PBS洗去培养基,每孔加入酸性磷酸酶底物检测溶液(用对硝基苯新鲜配制)100 μ l,继续培养90 min,加入终止液,室温下孵育5 min。酶标仪405 nm处测定各孔光吸收值。

2 结果

A549细胞经TRAIL作用后,测定结果为0.47±0.02,TRAIL与放线菌素D联合作用结果为0.36±0.02,TRAIL与顺铂联合作用为0.25±0.01,结果均有显著性差异(P＜0.01),见表1。

表1 TRAIL与化疗药物作用后A549细胞增殖情况(±s)

表1 TRAIL与化疗药物作用后A549细胞增殖情况(±s)

与对照组相比:*P＜0.01

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3 讨论

TRAIL可由体内的免疫系统正常表达,它能诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,而对正常的组织和细胞无明显毒性作用[2]。TRAIL凋亡传导路径是体内天然的抗肿瘤途径。经研究,TRAIL可以诱导非小细胞肺癌细胞发生凋亡[3],在体动物研究也表明,rhTRAIL能明显地抑制小鼠体内肺癌细胞移植瘤的增生,而对正常的小鼠没有毒副作用[4]。

化疗药物可以非特异性的与肿瘤细胞及正常细胞同时结合,但化疗药物在应用治疗量时,也会引起广泛的化疗副反应。最近的研究显示,非毒性剂量的化疗药物可以增加TRAIL对肿瘤细胞诱导凋亡作用[5]。也有一些明显的证据表明,TRAIL可以作为治疗非小细胞肺癌的药物,尤其是与化疗药物联合作用时可以克服TRAIL抵抗作用[6]。

本实验小组采用A549细胞株,应用TRAIL对其进行处理,并且联合顺铂、放线菌素D作用。结果发现:与对照组相比,A549细胞经TRAIL作用,可以发生凋亡作用,如与顺铂或放线菌素D联合作用,细胞增殖则明显受抑。说明TRAIL与化疗药物顺铂、放线菌素D联合作用后发生了协同作用。但TRAIL与化疗药物发生协同作用的机制是什么样的,还需要进一步深入研究讨论。

[1]Jin H,Yang R,Fong S,et al.Apo2 ligand/tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand cooperates with chemotherapy to inhibit orthotopic lung tumor growth and improve survival[J].Cancer Res,2004,64:4900.

[2]Anita C,Ling Qi,Patrick Mulligan,et al.TRAIL Agonists on Clinical Trials for Cancer Therapy:The Promises and the Challenges[J].Reviews on Recent Clinical Trials(Online),2009,(4):34.

[3]冯长根,周汉生,唐艳平,等.rhTRAIL诱导人肺癌细胞系A549的细胞凋亡表达谱变化研究[J].中国药学杂志,2006,41(9):675.

[4]Shi J,Zheng D,Liu Y,et al.Overexpression of soluble TRAIL induces apoptosis in human lung adenocarcinoma and inhibits growth of tumor xenografts in nude mice[J].Cancer Res,2005,65(5):1687.

[5]Song JH,Tse MC,Bellail A,et al.Lipid Rafts and Nonrafts Mediate Tumor Necrosis Factor-Related Apoptosis-Inducing Ligand-Induced Apoptotic and Nonapoptotic Signals in Non Small Cell Lung Carcinoma Cells[J].Cancer Res,2007,67(14):6946.

[6]Gajewski TF.On the TRAIL toward death receptorbased cancer therapeutics[J].J Clin Oncol,2007,25:1305.