王 爽,齐 玲,金 宏,张以忠,曹志友

(1.吉林医药学院 实验中心,吉林 吉林市132013;2.吉林医药学院直属医院)

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)在肿瘤的免疫监视中起到一定作用。rhTRAIL可诱导肿瘤细胞凋亡。研究表明,大多数非小细胞肺癌细胞株对TRAIL抵抗[1],因此,我们研究化疗药物与TRAIL联合作用对非小细胞肺癌细胞的作用机制。

1 材料与方法

1.1 细胞 非小细胞肺癌A549细胞株由吉林医药学院实验中心提供。

1.2 主要试剂 rhTRAIL(Peprotech公司),RPMI 1640细胞培养液、小牛血清(GIBCO公司),顺铂、放线菌素D及对硝基苯(上海生物工程技术公司)。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养 复苏A549细胞,用含10%血清的RPMI 1640培养液,置于培养箱中,37℃,5%CO2,饱和湿度下培养,隔日换液,1∶3传代。

1.3.2 TRAIL联合化疗药物对A549细胞增殖的影响 细胞融合至85%,胰酶消化,计数活细胞,以每孔8×103个细胞接种于 96孔板中,培养24 h,将细胞分为4组,分别加入TRAIL 100 ng/ml,TRAIL 100 ng/ml与顺铂10 μ g/ml,TRAIL 100ng/ml与放线菌素D10 ng/ml联合,对照组使用基础培养基。作用24 h后,小心弃上清,PBS洗去培养基,每孔加入酸性磷酸酶底物检测溶液(用对硝基苯新鲜配制)100 μ l,继续培养90 min,加入终止液,室温下孵育5 min。酶标仪405 nm处测定各孔光吸收值。

2 结果

A549细胞经TRAIL作用后,测定结果为0.47±0.02,TRAIL与放线菌素D联合作用结果为0.36±0.02,TRAIL与顺铂联合作用为0.25±0.01,结果均有显著性差异(P＜0.01),见表1。

表1 TRAIL与化疗药物作用后A549细胞增殖情况(±s)

表1 TRAIL与化疗药物作用后A549细胞增殖情况(±s)

与对照组相比:*P＜0.01

?

3 讨论

TRAIL可由体内的免疫系统正常表达,它能诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,而对正常的组织和细胞无明显毒性作用[2]。TRAIL凋亡传导路径是体内天然的抗肿瘤途径。……