黄小琪,陈松林,林英辉*,陈 晶,熊 彪

(1.广西中医学院第一附属医院a.分子生物学实验室;b.检验科,广西 南宁530023;2.钦州市第一人民医院检验科)

到目前为止,研究人员广泛认为结核性胸膜炎的诊断与鉴别诊断是临床难题之一[1]。目前的免疫学研究发现,结核性胸膜炎患者常存在Th1/Th2免疫失衡,主要表现为Th1型细胞免疫功能低下,但是对于最新发现的Th17细胞是如何参与结核性胸膜炎的免疫反应,本研究从Th17细胞入手,探讨其与结核性胸膜炎的诊断之间的相互关系,以期建立更为灵敏,特异的临床诊断方法。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择住院2009年10月-2010年10月之间,入院治疗的初次结核性胸膜炎患者30例,均经临床症状诊断,X光诊断、CT诊断以及病原学检查确诊,符合全国结核病分类与诊断标准[2]。在所有入选病例中,首先需要经过如下的入选标准选择:无脏器合并症状,无其它感染,无免疫相关性或免疫缺陷性疾病,入院近3个月内未用过激素及免疫抑制剂。所有入选病例中,男性20例,女性10例,年龄21岁-50岁,平均(42.8±9.4)岁。疾病对照组选择同期住院治疗的非结核性胸膜炎患者20例,排除结核病患者。其中男性13例,女性7例,年龄34岁-64岁,平均(52.4±11.5)岁。选择同期于我院体检诊断健康的体检人员20例为正常对照组,其中男11例,女9例;年龄23岁-52岁,平均(39.2±8.6)岁。

1.2 方法 所有结核性胸膜炎患者均接受正规抗结核化疗,并于入院时和经过治疗,症状缓解后抽取清晨空腹静脉血5 mL和胸水10 mL(正常对照人群只抽取静脉血)。非结核性胸膜炎患者入院时抽取清晨空腹静脉血5 mL和胸水10 mL。胸水与静脉血以3 000转/分钟的速度离心 15分钟(Eppendoff 5417-R离心机),分离胸水上清液和血清后,将其中含有的细胞用PBS稀释,常规密度梯度离心法分离其中含有的细胞。使用RPMI 1640培养液(加上5%FCS)在24孔板中培养细胞。同时加入刺激因子PMA 15 μ g/L,以及蛋白转运抑制剂BFA(10 mg/L),用以抑制免疫因子的分泌,使其聚集在细胞内部,便于其后的检查。阴性对照则选取不加刺激剂的细胞,混匀后将细胞置于37℃、5%CO2培养箱中培养。1.3 流式细胞检测 细胞培养箱中培养6小时后,收集细胞,加入FITC-CD 4抗体,室温避光孵育30分钟,以选择CD4+的细胞群落。之后PBS清洗3次。加入固定液继续室温避光孵育20min。然后加入破膜剂缓冲液洗涤3次。加入打孔缓冲液进行细胞破膜打孔,同时加入PE-IL-17A抗体,室温避光孵育30 min。最后用破膜剂缓冲液洗涤后上机检测。对照管中加入相应的同型对照抗体。应用贝克曼公司EPI-CS XL型流式细胞仪进行检测。

1.4 统计学分析 应用SPSS11.0软件进行统计学处理,两组之间差异比较采用t检验,多组差异比较采用单因素方差分析检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

见表1,2。

表1 三组人群外周血血清和胸水中的Th17细胞含量(%CD4+T细胞)

表2 结核性胸膜炎患者入院时和治疗后,其外周血血清和胸水中Th17细胞含量(%CD4+T细胞)

3 讨论

Th17细胞是新近被发现的一种新型的CD4阳性免疫细胞,由天然T细胞前体细胞和T0细胞分化而来,具有独立的调节机制,并特异性产生IL-17效应因子,因此在机体防御性的免疫反应中具有独特而重要的意义。Th17细胞通过产生IL-17从而与靶细胞的IL-17受体(IL-17R)结合并发挥功能,可以动员和富集中性粒细胞,具有促炎症性质,并可以有效地介导病变组织的炎症反应[3-5]。在动物模型中人们证实IL-17可以促进炎症因子IL-6和TNF-α的合成,因此人们提出以分泌IL-17为主的Th17细胞在某些炎症反应性疾病的发病中具有比Th1/Th2更重要的作用[6,7]。

在本研究中,我们发现,对于结核性胸膜炎的患者来说,其外周血和胸水中的Th17细胞含量都要显著高于正常人群,也要明显高于非结核性胸膜炎患者。该结果提示,Th17细胞可能特异性的参与到了结核性胸膜炎的发病过程中,至少在结核性胸膜炎中,Th17细胞可能有自己特殊的作用。而进一步的研究我们发现,经过治疗之后,随着患者的病情出现好转,Th17细胞的含量也出现了下降,这些结果说明Th17细胞可能全程参与到了结核性胸膜炎的发病过程中,并且可能成为其诊断的重要依据。

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