侯艳霞，郭莹莹，沈 楠，吴春艳，姜永萍，王靖飞*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/疫病诊断中心，黑龙江 哈尔滨 150001；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江 哈尔滨 150001)

禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)属于A型流感病毒，含有8个节段的负链RNA，其中节段5编码的核蛋白(Nucleoprotein，NP)在不同亚型的流感病毒中非常保守[1]，含有大量的细胞毒性淋巴细胞识别的抗原表位，其诱导的细胞免疫可抵御不同亚型流感病毒的感染[2-3]。目前许多关于流感病毒的T细胞表位在人和小鼠中已获得鉴定[4-5]。然而，禽主要组织相容性复合体(MHC)的结构和功能方面研究很少，限制了禽类抗流感病毒细胞免疫研究的开展。Haghighi于2009年首次鉴定了一株AIV血凝素(Hemagglutinin，HA)中被鸡的T细胞识别的T细胞表位[6]，但是关于鸡MHC限制性的AIV NP的T细胞表位还未见有报道。

T细胞表位与MHC I类分子结合后被CD8 T细胞识别，引起T淋巴细胞增殖，并伴随IFN-γ分泌量的增加[7]。为验证本实验室预测的AIV NP的3个潜在的T细胞表位，本研究用表达NP基因的重组质粒免疫SPF鸡，采集免疫鸡的脾淋巴细胞并用合成的候选肽刺激，检测相关的免疫应答指标，体外验证了候选肽的免疫原性。

1 材料和方法

1.1 实验材料 真核表达载体pCAGGS、H5亚型的多克隆阳性血清和293T细胞及原核表达的NP蛋白由本实验保存；AIV NP蛋白多肽NP89-97(PKKTGGPIY)、 NP198-206(KRGINDRNF)、 NP64-71(ERMVLSAF)和不相关肽，即鸡传染性支气管炎病毒(IBV)N蛋白T细胞表位肽N71-78(WRRQARYK)均由金思特科技有限公司合成；……