崔佳莹，李 印，于 扬，张文亮，邓国华，陈化兰

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001)

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型禽流感病毒(AIV)引起的一种禽类的感染和(或)疾病综合征，根据AIV致病力分为非致病性禽流感病毒(NPAIV)，低致病性禽流感病毒(LPAIV)和高致病性禽流感病毒(HPAIV)3种[1]。H5N1亚型病毒株属于HPAIV，其对养禽业的危害使得该亚型AIV的快速诊断成为研究热点[2-4]。

血凝素(Hemagglutinin，HA)为AIV的表面糖蛋白(75 ku)，是构成AIV囊膜纤突的主要成分之一，直接参与了AIV的致病过程[5]，编码HA的基因发生点突变引起抗原漂移是病毒HA发生抗原变异的主要原因之一[6]。本实验以AIV H5N1GD261作为免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了针对其HA蛋白的单克隆抗体(MAb)，对快速检测具有该抗原类型的AIV有着重要的应用价值[7]。

1 材料和方法

1.1 实验材料 AIV H5N1GD261分离株、骨髓瘤SP2/0细胞由本实验室保存；4周龄～6周龄及6周龄～10周龄清洁级BALB/c雌鼠购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心；弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、HAT选择培养基、HT培养基和PEG(MW1500)融合试剂、秋水仙素、灭活剂β-丙内酯、筛选剂8-AG均购自Sigma公司；胎牛血清、DMEM培养基购自Invitrogen公司；鼠源MAb亚类鉴定试剂盒、HRP和FITC标记羊抗鼠IgG购自Southern Biotech公司；底物OPD购自Seebio Biote-chnology公司。

1.2 MAb的制备与鉴定

1.2.1 动物免疫及MAb的制备 以H5N1GD261为免疫原，将病毒浓缩灭活后与弗氏完全佐剂等体积乳化，免疫6周龄～8周龄BALB/c小鼠，在首免后第15 d和30 d用弗氏不完全佐剂乳化的病毒加强免疫，细胞融合前3 d腹腔注射加强免疫。……