刘 洋，陈 维，宋志强，孙文静 ，李 媛，邹小辉，辛九庆*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室，黑龙江 哈尔滨 150001；2.东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030)

牛支原体(Mycoplasma bovis)属于支原体属，可引起犊牛的肺炎、乳腺炎、角膜炎和关节炎。M.bovis是柔膜体纲中继丝状支原体丝状亚种(Mycoplasma mycoidessubsp.mycoidesSC，MmmSC)对牛致病力最强的支原体[1-2]。该病原呈世界性分布[3]，2008年首次从我国某地区牛肺炎病例的牛肺中分离到M.bovis[3]。M.bovis引起的疾病与MmmSC引起的牛传染性胸膜肺炎(Contagious bovine pleuropneumonia，CBPP)具有相似的临床症状和病理剖检变化，不易鉴别诊断[4-6]。因此，迫切需求一种可靠的M.bovis血清学鉴别诊断方法。

国外商品化的检测M.bovis抗体ELISA诊断试剂盒有加拿大生产的检测M.bovis抗体ELISA诊断试剂(简称“Kit 1”)和比利时生产的试剂盒(简称“Kit 2”)。目前，尚未出现国产商品化的检测M.bovis抗体ELISA诊断试剂盒。因此，本实验室建立检测M.bovis抗体ELISA方法并组装成试剂盒(简称“HVRI试剂盒”)。本研究应用以上3种试剂盒对已知血清样品进行检测，统计检测结果与综合检测结果的符合率同时对3种试剂盒进行一致性分析，为HVRI试剂盒的应用提供了实验依据。

1 材料和方法

1.1 病原和血清 M.bovis湖北分离株由本实验室分离并鉴定，按照文献[3]方法培养至108CCU/mL(CCU为颜色变化单位)；采自不同地区自然感染发病牛血清样品19份，经血清学和病原学诊断为M.bovis感染；人工感染发病牛血清样品18份；牛传染性胸膜肺炎国际标准血清PS2(用于交叉反应)购自葡萄牙国家兽医实验室——世界动物卫生组织(OIE)指定的牛传染性胸膜肺炎国际参考实验室。……