猪嗜血支原体PCR及荧光定量PCR检测方法的建立和比较

2011-05-21张长莹张莉莉李玉峰李文良

中国预防兽医学报 2011年6期

张长莹，张莉莉，李玉峰，李文良，刘捷，陈闻，姜平

(南京农业大学动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095)

猪嗜血支原体(CandidatausMycoplasma haemosuis)是一种寄生于猪红细胞表面、血浆及骨髓内的寄生生物，可引起以溶血性贫血、黄疸、发热等为主要临床症状的传染病[1]，临床上患病猪因呈慢性感染而增加对其它呼吸道和消化道病原的易感性。

近年来，M.haemosuis病的流行呈增长趋势，而该病的常规检测方法主要为光镜检查和血清学方法。其中血清学方法包括补体结合试验和酶联免疫吸附试验等[2-3]，但由于M.haemosuis尚无成熟的体外培养方法，难以获得大量原始抗原而限制了血清学方法的应用。与镜检和血清学方法相比，PCR检测方法具有灵敏度高及特异性强的优点。Gwaltney等根据 M.haemosuis基因文库KSU-2克隆的序列资料，设计并合成引物，首次建立了M.haemosuis的PCR诊断方法[4]；Messick等根据M.haemosuis16S rRNA基因序列(U88565)设计3套引物进行PCR扩增，其中两套引物无非特异扩增[5]；Hoelzle等将纯化的M.haemosuis基因组用EcoRⅠ酶切后获得一段1.8 kb DNA片段，根据该片段设计引物建立了PCR方法[6]；Hoelzle等利用MSG1基因建立了荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法，可区别临床M.haemosuis病猪和健康猪[7]。目前国内也已经有PCR诊断方法的报道[8-10]，表明PCR检测方法的灵敏性高，是有效的病原确诊方法。

本研究以M.haemosuis的16S rRNA序列为靶序列，建立PCR和FQ-PCR诊断方法，选择效果较好的检测方法，为建立该病动物模型提供有效的检测手段。