张国彬 刘亚楠 张 宇

(1.河北联合大学研究生学院，唐山 063000;2.河北联合大学免疫学教研室，唐山 063000;3.华北煤炭医学院附属医院胸心外科，唐山 063000)

离体心脏的保存效果很大程度上决定心脏移植的成功与否［1］，目前主要通过改良心脏保存液的成分来延长心脏保存时间［2-4］。有研究［5-7］表明缺血预处理(ischemic preconditioning，IP)能显著增强心脏对缺血的耐受性，但它是一种损伤性的预适应。药物预处理［8-11］(pharmacological preconditioning)安全有效，通过药物激发或模拟机体内源性的保护机制起作用。研究［12］表明七氟烷预处理对心肌细胞的保护作用可能与HSP70表达有关。本研究旨在探讨非选择性KATP通道开放剂尼可地尔预处理诱导心肌细胞HSP70表达的改变，从而揭示离体供心的可能保护机制。

1 材料和方法

1.1 实验动物

选取24只成年SD雄性大鼠，体质量250～350 g，购自北京维通利华试验动物技术有限公司〔动物许可证号:SYXK(冀)2005-0038〕，温度22℃，湿度50%饲养。12 h光照/黑暗，自由摄食进水。

1.2 实验样品和试剂

尼可地尔购自美国Sigma公司，丙二醛(malonaldehyde，MDA)测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所，兔多克隆HSP70一抗、生物素化山羊抗兔IgG二抗、SP-9000免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 St-Thomas心肌保存液配方

Component Concentration/(mmol·L －1)__NaCl 100.0 NaHCO3 10.0 KCl 16.0 MgCl2·6H2 O 16.0 CaCl2·2H2 O 1.2______pH___________________________________________________7.8±0.02

1.4 动物分组及标本取材

大鼠采用抽签法随机分为2组，每组12只。对照组与实验组均注射相同剂量的0.9%氯化钠注射液或尼可地尔(0.1 mg/kg)，每天1次，第9次注射结束后10%水合氯醛麻醉并肝素化。剪开胸骨暴露心脏，阻断升主动脉，在主动脉根部注射4℃ St-Thomas液4～6 mL，待心脏完全停搏，心外膜变白后，摘除心脏，迅速修剪后放入4℃心肌保存液中。……