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骨髓间充质干细胞治疗兔膝RA模型软骨损伤的MRI评价

2011-04-16周钟珩崔延安刘红霞黄海青张全彬

中国临床医学影像杂志 2011年7期
关键词:实验

周钟珩,崔延安,刘 钊,刘红霞,黄海青,张全彬

(1.江苏省中医院MR室,江苏 南京 210029;2.南京医科大学附属南京第一医院骨科中心,江苏 南京 210006)

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性自身免疫性疾病,其基本病理特征是滑膜组织炎性增生伴关节软骨和骨组织的破坏。前期研究中已证实MRI能够评价RA的滑膜增厚和软骨的破坏情况[1]。骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有多向分化潜能,在特定条件下可分化为软骨细胞。本实验主要利用MRI观察BMSCs治疗兔膝RA模型后关节软骨的前后变化。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雄性纯种新西兰大白兔42只(南京医科大学动物实验中心提供),月龄6.3~8.0个月,平均 (6.9± 0.4)个月;体重为2.8~3.2kg,平均(3.0±0.1)kg。观察动物的食量、大小便、活动度、步态及精神状况,无明显异常后开始实验。

1.2 实验标本制备与分组

1.2.1 RA模型制备

用卵蛋白(美国Sigma公司)造模,于右侧后肢膝关节内注入5mg溶解的卵蛋白,24h内此关节出现红、肿、热、痛等急性炎症表现。

1.2.2 BMSCs提取和制备

于右胫骨平台下内侧松质骨穿刺,抽取骨髓1.5~2.0ml,使用肝素液抗凝,参照文献[2]方法分离和培养BMSCs。于倒置显微镜下观察,待细胞融合达80%时传代培养。取第2代(P2)细胞行流式细胞仪检测:CD34及CD68表达呈阴性,CD105表达呈阳性。鉴定后,P2细胞经0.25%胰蛋白酶消化计数后,制成1×107/ml细胞悬液。

1.2.3 实验分组和处理

选取新西兰大白兔42只,造模第4周取6只兔治疗前行MR和病理检查以对照,余36只随机分2组,即RA模型组和BMSCs治疗组,每组18只,BMSCs治疗组于造模后第4周在右后膝关节腔内注射BMSCs悬液0.3ml;RA模型组给予等量的无菌生理盐水于右膝关节腔内注射。……

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