裴新红，王 芳，于 湛

(郑州大学第一附属医院，郑州 450052)

2003年6月～2006年11月，我们采用免疫组化法检测了新的丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Maspin)蛋白、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在人乳腺癌组织中的表达，旨在进一步探讨乳腺癌的发生、发展机制。

1 材料与方法

1.1 材料 选择我院手术切除的乳腺癌组织标本79份(乳腺癌组)，均为女性，年龄32～67(47.1±11.33)岁。均经病理证实，且术前均未行放化疗。其中浸润性乳腺癌53例，非浸润性乳腺癌26例。另选乳腺纤维腺瘤组织标本31份(腺瘤组)、正常乳腺组织标本34份(正常组)，三组一般资料无统计学差异。主要试剂:鼠抗人Maspin单克隆抗体(英国Neomarkers公司)，兔抗人uPA多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司)。

1.2 Maspin、uPA表达检测 采用免疫组化SP法，试验步骤均按试剂盒说明书进行。结果判断标准:Maspin以胞质和(或)胞核内出现棕黄色细颗粒为阳性细胞，高倍镜下随机观察10个视野约1000个细胞或低倍镜下随机观察10个视野约4000个细胞，计数阳性细胞，＜25%为阴性(-)，25% ～50%为弱阳性(±)，51% ～75%为阳性(+)，＞75%为强阳性(++)［1］。uPA以细胞质出现棕黄色细颗粒为阳性细胞，同上法观察计数阳性细胞数，＜10%为阴性(-)，≥10%为阳性。对二者的相关性进行分析。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件，率的比较采用χ2检验，采用Spearman相关性分析法分析Maspin和uPA表达的相关性。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 Maspin、uPA表达 乳腺癌组、腺瘤组、正常组Maspin蛋白的阳性表达率分别为30.4%、67.7%、97.1%，乳腺癌组、腺瘤组明显低于正常组，乳腺癌组明显低于腺瘤组(P均＜0.05);uPA阳性表达率分别为 64.5、32.2%、26.5%，乳腺癌组、腺瘤组明显高于正常组，乳腺癌组明显高于腺瘤组(P均＜0.05)。

2.2 相关性分析 乳腺癌组织中Maspin蛋白表达与 uPA 表达呈负相关(r=-0.776，P=0.000)。

3 讨论

Maspin基因是1994年Zon等用减数杂交技术对正常乳腺组织和乳腺癌组织进行比较时发现的，证实其为新的丝氨酸蛋白酶抑制剂基因。文献报道，Maspin在正常乳腺上皮细胞内有表达，但在大多数乳腺肿瘤细胞系中不表达，提示Maspin基因与乳腺癌的发生有关［2］。Maspin主要定位于细胞质，也可定位于细胞表面［3］。Shi等将Maspin基因表达上调的转基因小鼠与WAP-SV40T抗原小鼠杂交，证实这种二次杂交小鼠肿瘤的生长和转移明显降低。邵志敏等［4］发现，乳腺肌上皮细胞分泌大量的Maspin蛋白，去除 Maspin后的人类肌上皮 HMS-1CM不再具有抑制乳腺癌细胞体外浸润的能力，提示Maspin蛋白在乳腺肌上皮细胞抑制乳腺癌细胞体外浸润能力方面起重要作用。本研究结果显示，乳腺癌组、腺瘤组明显低于正常组，提示Maspin作为肿瘤侵袭和转移潜能的抑制因子在乳腺癌中表达的缺失，可用于乳腺癌远处转移和患者预后不良的预测［5］。

人uPA基因位于第10号染色体上，长度为7258 bp，由11个外显子和10个内含子组成，成熟的mRNA 长度为 2.4 kb［6］。uPA 是一种似纤溶酶的丝氨酸蛋白水解酶，由肿瘤细胞或其他细胞分泌，主要作用于生理病理条件下的细胞迁移和组织修复。本研究乳腺癌组、腺瘤组明显高于正常组，提示uPA在肿瘤增殖与肿瘤复制过程中具有指示意义，可用于肿瘤早期的诊断，在肿瘤的诊治过程中具有重要的临床意义。本研究还发现乳腺癌组织中Maspin蛋白表达与uPA表达呈负相关，提示Maspin在乳腺癌中具有抑制肿瘤的作用。

Maspin低表达和uPA高表达在乳腺癌发生、发展中起重要作用，检测Maspin、uPA的表达水平可用于乳腺癌病情及预后的判断。

［1］丁耘峰，冯一中，平金良.Maspin在乳腺癌组织中的表达及临床病理意义［J］.苏州大学学报(医学版)，2007，27(3):396-398.

［2］Luppi M，Morselli M，Bandieri E，et al.Sensitive detection circulating breast cancer cells by reverse transcriptase polymerase chain reaction of maspin gene［J］.Ann Oncol，1996，7(6):619-624.

［3］Blacque OE，Worrall DM.Evidence for a direct interaction between the tumor suppressor serpin，maspin，and typesⅠ andⅢ collagen［J］.Biol Chem，2002，277(13):10783-10788.

［4］邵志敏，沈镇宙.乳腺肌上皮细胞抑制乳腺癌细胞体外浸润能力的研究［J］.中华医学杂志，1999，79(3):214-216.

［5］Cher ML，Biliran HR Jr，Bhagat S，et al.Maspin expression inhibits osteolysis，tumor growth，and angiogenesis in a model of prostate caner bone metastasis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2003，100(13):7847-7852.

［6］Andreasen PA，Kjoller L，Christensen L，et al.The urokinase-type plasminogen activator system in cancer metastasis［J］.Int J Cancer，1997，72(1):1-22.