孙中文，黄静芳，陶 鸿，易丽娴，孙 静，肖 洋

(1苏州卫生职业技术学院，江苏苏州215009;2苏州市检验医学生物技术重点实验室)

GL50分子作为B7家族的新成员，主要表达于树突状细胞(DC)、单核细胞、巨噬细胞和B细胞等抗原递呈细胞(APC)表面，参与T、B细胞的活化、分化和凋亡等［1～3］。近年研究证实，在关节炎患者的关节腔T细胞、系统性红斑狼疮患者的外周血T细胞、DC与T细胞共培养后的T细胞表面均可检测到 B7家族 B7-1的表达［4，5］。2010年3～6月，我们对GL50分子在活化T细胞表面的诱导性表达及其生物学意义进行了初步探讨，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 牛血清，RPMI1640基础培养基，健康人外周血T细胞，GL50单抗(本科室自制)，激发型CD3单抗、CD28单抗，鼠抗人 CD3单抗，Avidin-PE，Trizol，3H-TdR，淋巴细胞分离液 Ficoll;RT-PCR试剂盒，CO2培养箱，离心机，倒置显微镜及荧光显微镜，液体闪烁计数仪，流式细胞仪，RT-PCR仪;引物设计与合成由上海生工生物公司完成。

1.2 活化T细胞表面GL50分子阳性率测定 分别取不同时相(24～144 h)激发型CD3单抗联合CD28单抗活化的T细胞，用PBS洗涤2遍后分装于小试管中(5×105/管)，加入Biotin标记的GL50分子单克隆抗体各10 μl及小鼠IgG-PE 10 μl作为阴性对照，于4℃反应45min，充分洗涤后加入Avidin-PE 10 μl，于 4 ℃反应 45min，充分洗涤后采用流式细胞仪分析GL50分子阳性表达情况，同时以静止T细胞为对照。

1.3 活化T细胞表面GL50分子mRNA转录水平测定 分别取不同时相(24～144 h)激发型CD3单抗联合CD28单抗活化的T细胞，洗涤后采用Trizol一步抽提法抽提总RNA，加入随机引物和逆转录酶利用常规方法合成 cDNA。PCR反应体系为50 μl，IQ SYBR Green supermix 25 μl，上下游引物各 0.5 μl，cDNA 5 μl，PCR反应条件为94 ℃ 2min预变性，94℃ 40 s、56℃ 50 s、72℃ 1min，共40个循环。以βactin为内参照，常规PCR反应条件扩增目的DNA，扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳，紫外透射仪观察电泳结果;以RT-PCR仪进行分析。……