(河南省人民医院，郑州450003)

RCAS1是Sonoda等［1］在1996年新发现的一种 蛋白质，在子宫癌、卵巢癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中异常表达，并与肿瘤的分化、侵袭和恶性程度相关。Caspase家族的蛋白酶解级联反应控制着细胞凋亡的发生发展，是细胞凋亡的中心环节和执行者。Caspase-8广泛表达于各种成人组织，其中在血液淋巴细胞中表达尤为丰富［2］。研究发现，Caspase-8的低表达与人类多种恶性肿瘤的发生、发展以及肿瘤的免疫逃逸有关［3］。但二者在胃癌组织中的表达情况尚未见报道。本研究采用免疫组化SP法检测RCAS1、Caspase-8在胃腺癌组织中的表达，探讨其表达与胃癌发生发展的关系，为进一步寻求胃癌等恶性肿瘤的发生机制奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料 选取河南省人民医院和郑州大学第一附属医院2007年1～12月手术切除的胃腺癌组织46例，其中男26例，女20例，年龄33～81岁，患者术前均未接受化疗和放疗，均经常规病理证实。另选取手术切缘经病理证实为正常胃黏膜组织46例作为对照。全部标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，以备常规HE染色和免疫组化使用。

1.2 主要试剂 羊抗人RCAS1单克隆抗体由美国Zymed公司提供;兔抗人Caspase-8多克隆抗体由美国Scbt公司提供;免疫组化SP检测试剂盒及DAB显色试剂盒均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。

1.3 免疫组化 参照免疫组化SP试剂盒说明书进行操作。主要操作步骤为:5 μm石蜡连续切片，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，10%蛋清封闭，滴加一抗(RCAS1抗体稀释浓度为1∶200，Caspase-8多克隆抗体为即用型)，1%H2O2封闭内源性过氧酶，滴加二抗及链霉亲和素—过氧化物酶复合物，DAB-H2O2溶液显色，苏木素复染。每次实验均以PBS代替一抗作阴性对照，以已知RCAS1、Caspase-8蛋白阳性表达的食管癌组织作阳性对照。

1.4 结果判断 参照文献［4］高倍镜下随机选取5个视野，按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定。阳性细胞比例:≤10%为1分，11% ～50%为2分，＞50%为3分;按染色强弱:阴性为0分，淡黄色为1分，中度黄色为2分，棕黄色为3分。按照阳性细胞得分×染色强弱得分计总分，总分＜3为阴性、≥3为阳性。

1.5 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件，阳性率之间的比较用χ2检验，两变量之间关系用Spearman等级相关分析，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RCAS1、Caspase-8蛋白表达 RCAS1蛋白定位于胃腺癌癌细胞及正常胃黏膜上皮细胞质或细胞膜，呈棕黄色。Caspase-8免疫组化染色阳性细胞定位于细胞质，呈棕黄色颗粒，显色强时为棕褐色。阴性对照均无阳性信号显示，阳性对照有明显阳性信号显示。正常胃黏膜组织及胃腺癌组织中RCAS1蛋白的阳性表达率分别为60.87%(28/46)和84.78%(39/46)(P＜0.05)。正常胃黏膜组织及胃腺癌组织中Caspase-8蛋白的阳性表达率分别为80.43%(37/46)和65.22%(30/46)(P＜0.05)。

2.2 RCAS1与Caspase-8表达的相关性分析RCAS1、Caspase-8蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率经Spearman等级相关分析，呈明显负相关(r=-0.298、P＜0.05)。

3 讨论

RCAS1异常表达不但与一些恶性肿瘤的发生发展有关，而且RCAS1阳性病例临床预后较差，可作为临床预后判断指标，尤其是浸润性肿瘤［5，6］。本研究结果说明RCAS1蛋白低表达与胃腺癌的发生发展有关。RCAS1在肿瘤组织中过表达可以抑制自然杀伤细胞和T、B细胞的生长，并介导其凋亡，因此RCAS1可能与肿瘤免疫逃避有关［1］。FAS系统是目前研究最清楚的介导细胞凋亡的信号转导系统，FAS与其天然配体或相应膜抗体结合，通过激活Caspase家族完成细胞凋亡信号传递，是细胞凋亡的主要途径之一［5］。Caspase-8是死亡受体介导的凋亡途径中关键的启动子，主要以无活性的酶原形式存在于细胞中。有报道多种人类肿瘤在该区域杂合缺失，包括神经母细胞瘤、肺癌、头颈部癌、甲状腺滤泡性癌等［2］。Caspase-8基因甲基化、基因突变及其他表达异常也与某些肿瘤、自身免疫性疾病有关。故从其结构推测Caspase-8在恶性肿瘤的发生发展中可能起着重要作用［7，8］。本研究结果显示，Caspase-8蛋白高表达与胃腺癌的发生发展相关。RCAS1、Caspase-8蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率呈负相关，说明二者在胃癌等恶性肿瘤发生发展中存在某种联系，但其机制有待进一步深入研究。

［1］Sonoda K，Nakashima M，Kaku T，et al.A novel tumor-associated antigen expressed in human uterine and ovarian carcinomas［J］.Cancer，1996，77(8):1501-1509.

［2］Chang HY，Yang X.Proteases for cell suicide:functions and regulation of caspases［J］.Microbiol Mol Biol Rev，2000，64(4):821-846.

［3］Algeciras-Schimnich A，Barnhart BC，Peter ME.Apoptosis-independent functions of killer caspases ［J］.Curr Opin Cell Biol，2002，14(6):721-726.

［4］王晓兰，李晓莉，陈奎生.MMP-7与TIMP-1蛋白在食管鳞癌中的表达及其与肿瘤浸润、转移的关系［J］.医药论坛杂志，2009，30(8):1-6.

［5］Akashi T，Oimomi H，Nishiyama K，et al.Expression and diagnostic evaluation of the human tumor-associated antigen RCAS1 in pancreatic cancer［J］.Pancreas，2003，26(1):49-55.

［6］Izumi M，Nakanishi Y，Yoshino I，et al.Expression of tumor-associated antigen RCAS1 correlates significantly with poor prognosis in nonsmall cell lung carcinoma［J］.Cancer，2001，92(2):446-451.

［7］Stupack DG，Teitz T，Potter MD，et al.Potentiation of neuroblastoma metastasis by loss of caspase-8［J］.Nature，2006，439(7072):95-99.

［8］张晓峰，陈幕华，陈萍萍，等.食管癌组织中Caspase-8表达及临床意义［J］.山东医药，2008，48(38):21-23.