喻 卓，陈 鹏，段 理，何 波，沈志强*

(1昆明医学院第一附属医院，昆明650032;2昆明医学院)

血小板活化后可结合中性粒细胞，并激活所结合的中性粒细胞，中性粒细胞活化后分泌的某些细胞因子，进一步活化血小板［1，2］。因此，血小板—中性粒细胞的相互作用，在血栓形成及炎症过程中起着重要作用，阻抑血小板—中性粒细胞之间相互作用的药物将更有利于血栓栓塞性疾病的防治。松胞菌素D来源于肉球菌，我们在进行抗血小板药物筛选时发现其具有较强地抑制血小板聚集作用。2009年3月～2010年8月，我们在此基础上探讨了松胞菌素D在体内外的抗血小板作用，并进一步观察其对血小板与中性粒细胞之间相互作用的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康家兔，体质量1.8～2.2 kg，雌雄均用，由昆明医学院动物中心提供。

1.2 试剂与仪器 松胞菌素D由中科院昆明植物研究所刘吉开研究员提供，用前溶于0.9%生理盐水中(pH约7.0)。花生四烯酸(AA)、血小板活化因子(PAF)系Sigma公司产品，AA临用前溶于100 mmol/L Na2CO3溶液中，PAF用含0.25%小牛血清蛋白(BAS)的Tris-NaCl缓冲溶液稀释。腺苷二磷酸(ADP)系由Fluka化学公司提供，用前溶于生理盐水中。淋巴分离液(比重1.077)购自上海华精生物高科技有限公司。Hanks液(mmol/L，pH 7.4):NaCl 137，KCl 5，CaCl21.3，MgSO40.7，H2O 0.8，Na2HPO40.6，KH2PO40.4，NaHCO33.0，葡萄糖5.6，用前新配。LBY-NJ血液凝集仪，由北京普利生精密仪器研究中心(北京普利生科贸集团)提供;台式冷冻离心机(centra-MP4R)，由INTERNATIONAL EQUIPMENT COMPANY提供;THZ-C恒温振荡器，由江苏太仓市实验设备厂提供;Olympus像差显微镜属日本生产。

1.3 方法

1.3.1 富血小板血浆(PRP)与洗涤血小板的制备自清醒家兔颈总动脉取血……