赵小波，幸天勇，高砚春

(川北医学院附属医院普外科，四川 南充 637000)

近年研究发现，雌激素阴性的较雌激素阳性的乳腺癌患者，肿瘤细胞的远处转移及侵袭能力更强，预后更差［1］。中药在提高癌症患者的生存质量、延长生存期等方面对雌激素受体阴性的乳腺癌治疗发展带来了新的契机。抗疟药青蒿琥酯(ART)是青蒿素衍生物，体内外实验证实对肝癌细胞有诱导凋亡的作用［2，3］，对结肠癌等55种细胞株均有细胞毒作用［4］。国内尚未见ART对雌激素受体阴性乳腺癌细胞影响的相关报道。本实验采用ER阴性的乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象，探讨ART抑制乳腺癌细胞作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 药物、试剂及其配置

1.1.1 药物:ART由广西桂林第二制药厂生产。60 mg ART由5%碳酸氢钠1 ml配成储备液，－20℃保存。实验时用1640液稀释所需浓度，碳酸氢钠的终浓度＜0.09%

1.1.2 试剂:RPMI-1640(购于美国 Hyclone公司)，10%小牛血清(购于杭州四季青生物工程材料有限公司)，80 mg/L青霉素及120 mg/L链霉素(购于重庆医大附一院药房)，MTT(购于Sigma公司)。

1.1.3 免疫细胞化学:抗 Bax、抗 P21WAF1/CIP1、抗Bcl-2单克隆抗体(鼠抗人)、抗nm23多克隆抗体(兔抗人)及SP－9000(通用型)试剂盒，DAB试剂盒购于北京中山生物技术有限公司。

1.2 细胞培养与处理:MDA-MB-231购于中科院上海生物研究所细胞库。用含10%小牛血清的1640培养基，在37℃、体积分数为5%的CO2孵箱中常规培养传代。细胞长至瓶底80% －90%时处于对数生长期，用0.05%胰酶和0.02%EDTA混合液消化后，5分钟800转离心，弃上清液，制成单细胞悬液即可备用。

1.3 MTT比色法检测细胞增殖功能

1.3.1 实验分组:分为空白对照组、细胞对照组、溶剂对照组(0.09%NaHCO3)、药物组(2μmol/L、4μmol/L、6μmol/L、8μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)共9组。……