晏烽根，李庆林

(省部共建新安医学教育部重点实验室，安徽省中药研究与开发重点实验室，安徽中医学院，安徽合肥 230038)

新藤黄酸是从中药藤黄中提取分离出来的有效成分，我们实验室前期对新藤黄酸体内外抗肿瘤作用进行了初步探讨，表明新藤黄酸能够抑制肿瘤细胞生长，包括人结肠癌细胞 HT-29、人肝癌细胞BEL-7402、人白血病细胞K562等，并能诱导人非小细胞肺癌细胞A549凋亡［1］。而在鼻咽癌的研究中已有药物能诱导鼻咽癌细胞凋亡，例如高三尖杉酯碱和茶中多酚类物质EGCG等报道［2－3］。但新藤黄酸对鼻咽癌细胞CNE-1的作用尚未见报道，因此本文进行了这方面研究。

1 材料与方法

1.1 材料药物:新藤黄酸(纯度:≥99.0%;批号:20090314)为安徽中医学院自制;抗体β-actin、Cytochrome C、p38、ERK1/2 购自 Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz，CA，USA)公司;Caspase-3 购自Bioworld(Bioworld Technology，MN，USA);p-p38、p-ERK1/2购自Cell Signaling(Cell Signaling Technology，MA，USA)公司;Western blot和其他试剂来自Abcam(Cambridge，MA，USA)或者 Sigma-Aldrich(Saint Louis，MO，USA)公司。

1.2 细胞培养鼻咽癌细胞CNE-1购自美国细胞菌种库(ATCC)，细胞在体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基中培养。并于37℃，5%CO2条件下恒温恒湿培养箱中培养，选取对数生长期细胞进行实验。

1.3 倒置显微镜观察细胞形态变化选取CNE-1细胞对数生长期接种于6孔板，并贴壁培养过夜。各实验组按要求给予新藤黄酸不同浓度和时间的药液加药处理细胞，同时设control组，处理完后在倒置显微镜下观察并拍照。

1.4 MTT实验CNE-1细胞用胰酶消化并稀释约为1×106·L－1的活细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔180 μl，每组设6个复孔，贴壁过夜后加不同浓度的新藤黄酸药液20 μl，使其终浓度分别为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 和 8.0 μmol·L－1，control组加入20 μl完全培养基，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养不同时间……