张成标，潘志强，刘勇林

(徐州医学院1.江苏省麻醉学重点实验室、2.生理学教研室，江苏徐州 221002)

肾脏髓袢升支粗段(thick ascending limb，TAL)对NaCl的主动重吸收启动了髓质渗透梯度的形成，其动力来自管周膜上的钠－钾泵。50pS钾通道是管周膜上分布最多的钾通道［1－2］，在NaCl的主动转运中发挥重要作用。50pS钾通道的活性是否受钠－钾泵活动的影响，目前尚不清楚。本实验利用单通道膜片钳技术，观察钠－钾泵抑制剂ouabain对髓袢升支粗段管周膜50pS钾通道活动的影响，探讨50pS钾通道是否在功能上与钠－钾泵偶联。

1 材料与方法

1.1 肾小管的分离 SD大鼠，体质量70～120 g，♀♂不拘。由徐州医学院实验动物中心提供。大鼠经10%的水合氯醛(400 mg·kg－1)腹腔麻醉后，立即打开腹腔取出肾脏，去除包膜，从肾脏的中间部分用刀片切出厚约0.5～1 mm的冠状切片，浸入浓度为1 g·L－1胶原酶溶液，放进37℃恒温水浴箱中消化45～55 min。在解剖显微镜下分离出肾小管髓袢升支粗段，放在涂有多聚赖氨酸的载玻片(5 mm×5 mm)上固定，并移送至已加入浴液的膜片钳系统的细胞记录槽中。

1.2 膜片钳单通道记录 用P-97型微电极拉制仪(Sutter，美国)四步拉制玻微电极，微电极尖端的直径约为0.5～1.0 μm，拉制完成后再适度抛光。在内充电极内液时，电极的入液电阻为10～30 MΩ。

选取清洁、光滑、完整的肾小管进行膜片钳实验。本实验主要采用细胞贴附式(cell-attached)单通道电流记录方法。对经胶原酶消化过的髓袢升支粗段肾小管的管周膜进行封接，形成高阻封接后即形成细胞贴附式记录模式。实验使用的膜片钳系统为Multiclamp 700B膜片钳放大器(Axon公司，美国)和Digidata 1440A模－数转换器(Axon公司，美国)，记录和分析软件为pCLAMP 9.2(Axon公司，美国)。……