魏 雯,刘 桢,陈 曦,李楠静,李立兰,毕 锋

(四川大学华西医院肿瘤中心腹部肿瘤科,成都 610041)

双环铂是由北京兴大科学系统公司开发的新型铂类化合物,是我国具有完全自主知识产权的化学Ⅰ类抗癌新药,体外研究和Ⅰ期临床试验显示双环铂具有低毒、高效的抗肿瘤活性,是前景较好的新一代铂类抗癌药物[1-2]。本试验选用双环铂作用于8种耐奥沙利铂或伊立替康的结肠癌耐药细胞系及其原代细胞,旨在测试双环铂对奥沙利铂或伊立替康有无交叉耐药性,及双环铂对耐药结肠癌细胞的化疗敏感性。为推广双环铂的临床应用,为耐药患者提供更多的化疗选择奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 选取由四川大学华西临床医学院信号转导实验室提供的8种结肠癌原代细胞及其耐药细胞共配对成8组(耐奥沙利铂和耐伊立替康各4组),所有耐药细胞系均由本实验室研究人员用浓度梯度递增法诱导建立,经反复测试证明其耐药性能稳定[3],耐药指数(RI=原代 IC50/耐药IC50)为:COLO320和COLO320/OHP(10.16),COLO320和COLO320/CPT(25.87),SW620和SW620/OHP(21.06),SW620和SW620/CPT(19.38),SW480和SW480/OHP(12.19),SW480和SW480/CPT(14.13),LOVO和LOVO/OHP(13.78),LOVO和LOVO/CPT(15.56)。

1.2 试剂 RPMI 1640培养液(Gibco公司),新生小牛血清(Gibco公司),胎牛血清(杭州四季青公司),四甲基偶氮唑盐(MT T,上海华舜生物工程有限公司),二甲基亚砜(DMSO,重庆医药股份有限公司化玻分公司),双环铂(北京市兴大科学系统公司)。

1.3 方法 以原代细胞COLO320和耐药细胞COLO320/OHP为例。

1.3.1 细胞培养 将COLO320与COLO320/OHP细胞接种到含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中,置于37℃,5%CO2饱和湿度孵箱内培养(thermo),细胞呈单层贴壁生长。用0.1%胰酶消化传代,以0.1 μ g/mL的奥沙利铂维持其耐药性。……