乳腺癌线粒体细胞色素氧化酶-Ⅱ基因突变检测

2011-02-06闫斌韩丽红于跃利

当代医学 2011年1期

闫斌韩丽红于跃利

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，在我国占全身各种恶性肿瘤的7%～10%。近年来，线粒体DNA（m itochond rial DNA，m tDNA）突变与肿瘤关系的研究越来越受到人们的重视，并且在多种人类肿瘤中都已检测到m tDNA突变。本研究拟通过对乳腺癌组织m tDNA的细胞色素氧化酶-Ⅱ区测序分析，了解中国人乳腺癌m tDNA的细胞色素氧化酶-Ⅱ的突变情况，以期为乳腺癌病因学的研究提供实验依据，并为临床乳腺癌的诊断和治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

随机收集2008年1月～2009年1月在包头医学院第一附属医院普外科切除的乳腺癌组织标本20例，以及对应的癌旁组织标本，标本取回后于-80℃冰箱保存，均经该院病理科证实为乳腺癌。

1.2 乳腺癌组织标本m tDNA的细胞色素氧化酶-Ⅱ区PCR扩增

按照DNA提取试剂盒（（Prom gea公司）说明书提取20例乳腺癌组织和癌旁组织的DNA。通过软件分析设计出一对引物，上游引物：5’-atggcacatgcagcgcaag t-3’，下游引物：5’-ggtaaatacgggccctatttc-3’。PCR反应体系50μL，水33.5μL，10×bu ffer（无M g2+）5μL，上、下游引物各1μL，4×dNTP4μL，25mM的Mgcl24μL，Taq DNA聚合酶0.5μL（试剂均来自Promega公司），DNA模板1μL。PCR反应条件：94℃5m in；94℃15s，65℃30s，72℃40s，35个循环。产物于1%琼脂糖凝胶中电泳，电压120V，电泳30m in。凝胶成像分析系统观察记录结果。

1.3 测序及分析

由百泰克公司使用A BI3730X L测序仪对PCR扩增产物进行测序。测序果用Bioed it软件进行分析，与Gen Ban k序列（AC_000021）对比，在PUBMED网上进行氨基酸序列比对，确定是否为突变。