金大智，张 政，罗 芸，叶菊莲，程苏云，吴 方，金 郁

多重荧光定量PCR甄别3种霍乱弧菌相关毒素基因＊

金大智1，张 政1，罗 芸1，叶菊莲1，程苏云1，吴 方2，金 郁3

目的 为了判定霍乱弧菌是否携带相关毒力因子，研发一种快速、准确、特异检测霍乱弧菌3种毒素基因的多重荧光定量PCR方法。方法针对霍乱弧菌ctx A、ace、zot基因设计引物和探针，建立PCR体系，对70株霍乱弧菌分离株进行鉴定，采用直接测序方法对鉴定结果进行验证。结果建立的多重实时荧光定量PCR方法可同时准确、特异地鉴定霍乱弧菌菌体携带的3种毒素基因，不携带毒素基因的菌株均未出现阳性检测结果。菌体检测的最低检出限度ctx A基因：102CFU／m L，ace基因和zot基因：10 CFU／m L。构建了3种毒素相关基因阳性质粒，ace基因和zot基因的最低检出限度为10 copies／μL，ctx A基因的最低检出限度为102copies／μL，定量检测批间和批内的变异系数均小于5%；对70株霍乱弧菌分离株进行评价，结果显示其中40株（57．2%）携带ctx A毒素基因、31株（44．3%）携带ace毒素基因、46株（65．7%）携带zot毒素基因，通过测序方法验证，符合率达到100%。结论本文建立的多重实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性好、灵敏度高，为霍乱弧菌的现场流行病学调查和疫情监测提供了快速、可靠的鉴定工具。

多重实时荧光定量PCR；霍乱弧菌；毒素

霍乱是由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，是《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病之一，具有发病急、传播快、波及范围广等特点，曾在世界上引起多次大规模流行。主要表现为呕吐、失水、腹泻等症状［1－2］。目前……