张治华 黄琦 杨军 汪照炎 吴皓

自身免疫性内耳病(autoimmune inner ear diseases，AIED)的特征为病程达数周或数月，双侧不对称或单侧快速进展性、波动性感音神经性听力下降，可伴平衡功能失调。如早期诊断和治疗，可有效控制和逆转其听力下降症状[1]。研究发现[2]，梅尼埃病(特别是双侧)、遗传性聋也可能因自身免疫反应致耳蜗、前庭功能障碍而引发。

虽然AIED发病机制目前尚不明确，但已发现多种抗原与其相关，其中髓鞘P0蛋白(myelin protein zero, MPZ)因与周围神经病关系密切而受到关注[3]。MPZ是一种分子量为30 KD的糖蛋白，属于免疫球蛋白基因超家族，分布于哺乳动物周围神经系统Schwann细胞膜上及内耳蜗轴的听神经纤维和螺旋神经节，是周围神经髓鞘的主要结构成分，功能上促神经细胞生长、影响细胞信号传导等，也可作为抗原与自身免疫性内耳病患者自身抗体结合而产生免疫应答，使神经产生脱髓鞘病变。

针对AIED诊断缺乏明确实验室指标的难题，本研究旨在通过检测快速进展性AIED和梅尼埃病患者周围血清MPZ抗体的表达，初步探讨周围血清MPZ抗体水平对此类疾病的诊断价值。

1 资料与方法

1.1研究对象 选取2009年1月至2010年3月在上海交通大学医学院附属新华医院耳鼻咽喉头颈外科门诊就诊的AIED患者共40例(研究组)为研究对象，其中，快速进展性AIED 14例(35%)，梅尼埃病11例(27.5%)，遗传性聋15例(37.5%)。男17例，女23例，年龄6～52岁，平均27.33±16.29 岁。选取其他自身免疫性疾病40例作为对照组，男22例，女18例，年龄15～46岁，平均25.41±11.27岁。

病例入选和剔除标准如下：研究组中快速进展性AIED患者为单侧/双侧听力下降，PTA>30 dB HL，病程在4周至4月；梅尼埃病患者则根据美国耳鼻咽喉头颈外科学会(AAO-HNS)诊断标准[4]作出诊断，PTA>30 dB HL，病程1～3年；遗传性聋患者具有耳聋家族史和/或基因突变检查阳性，剔除有明确药物性或创伤性致聋者；对照组为确诊的其他自身免疫性疾病患者，包括格林巴利综合征、皮肌炎等，剔除听力损伤者。

1.2研究方法 所有研究组对象取血时均处于听力下降发作或持续期，对照组患者处于疾病发作期，在接受治疗前取周围静脉血2 ml，离心后取血清，存放于-20℃冰箱内保存，在8周内完成检测。

采用酶联免疫标记法(ELISA)分别定量检测患者P0蛋白抗体IgG和IgM浓度。试剂盒分别为人P0蛋白抗体IgG、IgM酶联免疫分析试剂盒(美国RB 公司，上海玉博生物科技有限公司代理)。应用双抗原夹心法检测标本中人P0 蛋白抗体IgG和IgM水平。用纯化的人P0 蛋白抗体IgG和IgM抗原包被微孔板，制成固相抗原，分别往包被抗原的微孔中依次加入P0 蛋白抗体IgG和IgM，再分别与HRP 标记的P0 蛋白抗体IgG和IgM抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的P0 蛋白抗体IgG和IgM呈正相关。用酶标仪(BioTek，RPPWL/96)在450 nm波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中人P0 蛋白抗体IgG和IgM浓度。IgG检测范围：2～80 ng/L ，IgM检测范围：1～70 ng/L。

1.3统计学方法 采用SPSS 13.0软件对结果进行Mann-Whiney U检验。

2 结果

2.1研究组和对照组周围血清MPZ抗体表达浓度 研究组周围血清MPZ抗体IgG和IgM明显高于对照组(P<0.01)。比较不同类型AIED的IgG浓度，可见其浓度由高至低依次为快速进展性AIED、梅尼埃病、遗传性聋，三者之间差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)，IgM浓度亦呈现相同趋势。而对照组IgG和IgM浓度接近遗传性聋者，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。

表1 各组周围血清P0蛋白抗体IgG、IgM浓度比较(ng/L)

2.2双侧梅尼埃病患者周围血清P0蛋白抗体IgG、IgM浓度 梅尼埃病患者IgG浓度与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05), 但IgM浓度却明显高于对照组(P<0.05)。其中4例双侧梅尼埃病患者的IgG浓度为57.00±8.04 ng/L(范围：47.23～66.92ng/L)，IgM浓度为50.86±1.99 ng/L(范围：48.57～53.36 ng/L)，不仅明显高于对照组(P<0.01)，也高于单侧梅尼埃病患者[IgG浓度32.14±11.38 ng/L(范围：19.10～45.35 ng/L)，IgM浓度31.47±15.56 ng/L(范围：13.57～53.36 ng/L)](P<0.05)。双侧梅尼埃病患者周围血清IgG和IgM浓度接近快速进展性AIED患者，两者差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3快速进展性AIED和双侧梅尼埃病周围血清P0蛋白抗体IgG和IgM浓度比较 快速进展性AIED患者周围血清P0蛋白IgG、IgM浓度≥50 ng/L者均占多数，<50 ng/L仅少数。双侧梅尼埃病患者中P0蛋白IgG浓度≥50 ng/L者和<50 ng/L者各占一半，而IgM浓度≥50 ng/L者占75%，<50 ng/L者仅25%(表2)。与之比较，对照组中，P0蛋白抗体IgG和IgM浓度大部分<50 ng/L。

表2 快速进展性AIED和双侧梅尼埃病患者周围血清P0蛋白抗体IgG、IgM浓度(例，%)

3 讨论

AIED诊断率极低，主要原因可能是诊断标准不明确，基于经验性治疗回溯确诊；无法对内耳作活检以取得病理诊断及无确切实验室检验方法等，所以，目前报道其发病率仅为1/5 000～1/10 000。鉴于近年来对AIED的深入研究，将部分听神经病、特发性突聋、梅尼埃病、耳硬化症、遗传性聋等病亦纳入AIED范畴[2]，故其发病率应远高于常见报道，因此，如何提高诊断效率以便早期治疗是值得耳科医师注意的问题。

AIED机制不明，动物实验揭示T细胞介导的自身免疫反应导致感音神经性听力下降[5]。多项研究旨在确定AIED自身抗原，以获得对其诊断最有力的证据[6，7]，包括II型、IX型胶原(HLA-II、IX)、热休克蛋白-70(HSP70)等，但皆因特异性和敏感性不高，无确切的临床价值。

MPZ于1994年由Cao[7，8]提取发现，为髓鞘蛋白，已知其基因突变与周围神经病关系密切[9，10]。Starr[11]在以听神经纤维不均匀脱髓鞘为特征的听神经病患者外周血清中发现抗MPZ抗体，并证实两者有关联。

本研究发现AIED患者周围血清MPZ抗体IgG和IgM浓度比对照组明显增高(P<0.01)，在不同类型AIED比较中，快速进展性AIED患者MPZ IgG和IgM、梅尼埃病患者MPZ IgM有诊断意义，而后者的MPZ IgG以及遗传性聋患者MPZ IgG和IgM却无诊断意义，提示MPZ对于AIED的诊断有一定特异性，但可能存在不同MPZ亚型，尚待深入研究。

值得注意的是，周围血清MPZ抗体检测并非仅对快速进展性AIED有诊断价值。本研究中梅尼埃病患者虽仅IgM浓度升高，与文献报道梅尼埃病患者P0蛋白抗体检出率5.4%～45.8%[8,12，13]相符，表明MPZ抗体对于梅尼埃病的诊断有一定敏感性。但进一步分析发现双侧梅尼埃病患者血清MPZ抗体IgG和IgM浓度均远高于对照组，诊断价值接近于快速进展性AIED，可见，周围血清MPZ抗体检测诊断双侧梅尼埃病的价值明显高于单侧，也间接提示周围血清MPZ存在不同亚型的可能。

正常人血清中IgG占70%～75%，IgM仅占6%，故IgM升高较IgG更有诊断意义。从本研究结果看，无论是快速进展性AIED还是双侧梅尼埃病患者，其周围血清MPZ IgM浓度对诊断的敏感性好，大于50 ng/L者占75%以上，而IgG浓度却未达到类似结果。提示对于快速进展性AIED和梅尼埃病患者，检测周围血清MPZ抗体IgM浓度更具临床诊断意义。

总之，周围血清MPZ抗体表达，特别是IgM的表达，对于快速进展性AIED和双侧梅尼埃病的诊断，有较高敏感性和特异性，但本研究病例较少，应在今后研究中扩大样本量进一步深入研究。

4 参考文献

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