王彦芳 杨鹏飞 张丽萍 平芮巾 刑福彬 咸庆杰 胡孔新

(1.德州市中心血站 山东德州 253000;2.中国检验检疫科学研究院)

1 前言

西尼罗病毒 (West Nile Virus,WNV)属黄病毒科 (Flaviviridae)、黄病毒属 (Flavivirus),日本脑炎病毒血清型。该病毒是一种虫媒病毒,主要以尖音库蚊[1]传播为主,以鸟类为主要宿主,可引起人畜共患的自然疫源性疾病。西尼罗病表现为发热、头痛等流感样症状,也可表现为中枢神经系统感染症状,严重者可死亡,病死率为 5-14%[2-5]。WNV为单股正链 RNA病毒[6],基因组全长 10962bp[7],基因组 5′端为结构基因,约占基因组全长 1/4,其余为非结构蛋白基因。病毒基因组 RNA可以直接作为 mRNA,翻译 3种结构蛋白和 7种非结构蛋白,其排列顺序为C-pr M-E-NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-NS4B-NS5。其中的 NS1蛋白是一种非结构分泌型糖蛋白,在黄病毒蛋白中高度保守[8],它已经被证明是黄病毒感染动物体内的一种可以产生保护性抗体的有效免疫原[9-12],可诱导产生高滴度抗体,无论在疫苗研制还是诊断试剂的开发上均具有重要的意义[13,14]。本研究用原核表达系统表达出西尼罗病毒 WNV FJ151394.1株的 NS1蛋白,并对其免疫原性进行了初步研究。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 试验样品

原核表达载体 pET30a、宿主菌 DH5α、BL21(DE3)由中国检验检疫科学研究院卫生检疫研究所保存。

2.1.2 主要试剂

His-tag Monoclonal Antibody为美国 Novagen公司产品;HRP标记的山羊抗小鼠 IgG系中杉金桥公司产品;HRP标记的羊抗兔 IgG是美国 Sigma公司产品。

2.2 试验方法

2.2.1 重组质粒的构建

从 Genbank中检索获得WNV FJ151394.1株的NS1蛋白基因序列,于其 5’引入 agatctgatg,3’引入caccatcatcatcatcattaataggaattc,送至擎科公司合成。合成的基因全序列经限制性内切酶 BglⅡ和 BamHⅠ酶切后与 pET30a连接,得到重组质粒 pET30a-WNV-NS1。……