李 慧,安莲效,郭 静,顾月清

(中国药科大学 生命科学与技术学院,江苏 南京 210009)

人雌激素受体β绿色荧光蛋白真核表达载体的构建与表达

李 慧,安莲效,郭 静,顾月清

(中国药科大学 生命科学与技术学院,江苏 南京 210009)

目的 构建人雌激素受体β(ERβ)绿色荧光蛋白 (GFP)真核表达载体,并稳定转染乳腺癌 MCF-7细胞。方法 通过双酶切将 pCMV 5-hERβ中的人 ERβ cDNA克隆到 pEGFP-C3中,构建并鉴定重组质粒 pEGFP-hERβ,然后转染乳腺癌MCF-7细胞,采用 G418(500μg/mL)筛选出稳定转染的细胞系,在荧光显微镜下观察融合蛋白质在真核细胞内的表达分布,并采用逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)检测 ERβ的 mRNA转录水平。结果 成功构建重组表达载体 pEGFP-hERβ,有效转染并筛选出稳定转染 ERβ基因的 MCF-7细胞系,外源性 ERβ基因在MCF-7细胞中获得了有效转录,并在细胞质和细胞核中均广泛分布。结论 建立了稳定表达 ERβ的MCF-7细胞系,为筛选 ERβ调节剂和进一步研究 ERβ在乳腺癌中的作用及其机制奠定基础。

雌激素受体β;载体构建;转染;MCF-7细胞

乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一,其发病率占全身各种恶性肿瘤的 7%～10%。20世纪以来,乳腺癌的发病率在世界各地均有上升的趋势,在欧洲、北美占女性恶性肿瘤发病的第 1～2位,因此积极研发用于乳腺癌治疗的新靶点新方法具有重要的意义。雌激素是乳腺生长和发育所必需的,在乳腺癌的发生发展中亦具有重要作用,它主要通过与雌激素受体 (estrogen recep tor,ER)α和β结合来调控靶基因的表达,产生生物学效应。1996年,Kuiper等[1]首次由大鼠前列腺和卵巢 cDNA文库中克隆得到了新的雌激素受体亚型 ERβ,它与 ERα一样,属于核受体超家族成员,是一类配体调节的转录因子,通过与不同配体和反应元件结合,调节一系列靶基因转录,进而发挥生物学作用。……