李志士,刘铁梅

(1.长春中医药大学附属医院,吉林长春 130021;2.吉林大学中日联谊医院输血科,吉林长春 130033)

基因芯片检测输血传播病毒方法的实验研究

李志士1,刘铁梅2

(1.长春中医药大学附属医院,吉林长春 130021;2.吉林大学中日联谊医院输血科,吉林长春 130033)

目的建立基因芯片快速检测经输血传播病毒核酸的方法,进而探讨该方法用于检测临床标本的可行性。方法通过PCR获得TTV病毒ORF1基因的DNA片段,克隆,从重组质粒扩增DNA片段,并点到玻璃载体上,制成芯片。与TTV病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒及戊型肝炎等病毒的PCR产物进行杂交,以检测探针的特异性。结果该基因芯片探针仅与TTV毒株的PCR产物杂交呈阳性,与对照病毒的PCR产物杂交呈阴性。敏感性试验显示,用该方法检测了27份疑似TTV临床病料,22份阳性;而用PCR法扩增TTV ORF1基因确诊为阳性的只有19份。结论利用基因芯片检测TTV的PCR产物,特异性和敏感性强,可作为TTV临床标本检测方法。

经输血传播病毒;基因芯片;检测

(Chin J Lab Diagn,2010,14:0887)

输血传播病毒(TTV)最早由Nishizawa等1997年从1例不明原因的输血后非甲-庚型肝炎患者血清中发现[1]。TTV是已知的环病毒科中唯一感染人类的病毒[1]。目前检测TTV感染所采用的方法是血清巢氏PCR法。本研究通过PCR法扩增TTV核酸最保守部分ORF1基因的DNA片段,克隆,从重组质粒扩增DNA片段,并点到玻璃载体上,制成芯片,检测TTV的PCR产物。对芯片探针的基因序列分析证明其核苷酸序列具有高度的保守性,理论上可用于TTV不同血清型的检测。

1 材料与方法

1.1 材料

肝组织与血清标本长春地区的TTV阳性患者。……