刘丽波，薛一雪，王萍

（中国医科大学 基础医学院神经生物学教研室，沈阳 110001）

脑胶质瘤是严重影响人类健康的疾病，其预后差、生存期短，除手术治疗外，化疗是脑胶质瘤治疗的主要手段之一，但由于血肿瘤屏障（blood-tumor barrier，BTB）的存在限制了抗肿瘤药物进入中枢神经系统，严重影响了化疗疗效［1］。为了将药物转运到肿瘤组织，选择性地增加血肿瘤屏障的通透性是一个理想的策略，研究发现小剂量缓激肽（bradykinin，BK）可以选择性开放血肿瘤屏障，却不影响正常脑组织毛细血管的通透性［2］。药物通过血肿瘤屏障到达肿瘤细胞主要有两条途径：增加吞饮小泡数量的跨细胞途径和开放紧密连接的细胞旁途径，研究证明缓激肽可同时通过上述两条途径选择性开放血肿瘤屏障［3，4］。我们的前期研究进一步证明BK可通过降低肿瘤微血管的紧密连接相关蛋白occludin、zonula occluden-1（ZO-1）和 claudin-5 的蛋白水平开放紧密连接［5］，但BK是否能够影响紧密连接相关蛋白的mRNA水平及其调节机制仍不清楚。cAMP反应元件结合蛋白 （cAMP response element binding protein，CREB）是一种重要的核转录因子，可能通过影响紧密连接相关蛋白的转录调节血脑屏障的通透性［6］。本研究旨在探讨BK对紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的转录调节作用，并分析可能的调节机制，进一步完善BK开放血肿瘤屏障紧密连接机制的阐述。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物：健康雌性Wistar大鼠112只，体质量180～200 g，购于中国医科大学实验动物中心。

1.1.2 试剂和器材：缓激肽、葡聚糖购于Sigma Chemical公司；TRIzol购于Invit rogen公司；RT-PCR试剂盒购于大连TaKaRa公司；兔抗大鼠CREB和兔抗大鼠p-CREB抗体购于Cell Signaling公司；……