林志楠，罗红飞，都健，裴丽娜，刘佳，郭宁宁，张克莹

（中国医科大学 附属第一医院内分泌科，沈阳 110001）

2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）发病的两个关键因素是胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）和胰岛β细胞功能障碍［1］。近年来多项研究表明，内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）在IR的发生过程中发挥着重要作用［2］。本研究通过高脂喂养并经高血浆胰岛素-正常血糖钳夹技术评估胰岛素抵抗大鼠模型，在此基础上采用Western blot方法检测大鼠肝脏组织ERS标志分子PKR样内质网调节激酶（PKR-like endoplasmic reticulum regulating kinase，PERK） 和磷酸化 PERK（phosphorylated PKR like endoplasmic reticulum regulating kinase，p-PERK）蛋白表达水平的变化，探讨IR发生的分子机制。

1 材料与方法

1.1 胰岛素抵抗大鼠模型的建立

具体方法参照文献［3］。SPF级4周龄雄性Wistar大鼠30只，体质量80～120 g，购自中国医科大学实验动物中心。大鼠适应性喂养1周后，随机分为正常饮食组（NC组，n=15）和高脂饮食组（HF组，n=15）。大鼠饲养于中国医科大学实验动物中心屏障系统中，温度控制在（23±2）℃，湿度控制在60%左右，明暗交替周期为12 h。NC组给予基础饲料喂养，作为对照组。HF组给予高脂饲料喂养，建立胰岛素抵抗大鼠模型。每周固定时间监测大鼠体质量和尾静脉血糖。10周后，每组随机抽取5只行高血浆胰岛素-正常血糖钳夹（hyperinsulinemic-euglycemic clamp，HEC）以评估胰岛素抵抗大鼠模型建立。基础饲料配方参照文献［3］。高脂饲料配方：100g高脂饲料含基础饲料60 g、新鲜猪油30 g、低脂奶粉10 g；热量比：蛋白质14%，脂肪59%，碳水化合物27%。

1.2 高血浆胰岛素-正常血糖钳夹试验

具体方法参照文献［4］。左颈总动脉接肝素生理盐水注射器，右股静脉接三通管后分别接装有40 mU/mL的人胰岛素注射液（丹麦诺和诺德公司产品）和10%葡萄糖注射液的50 ml注射器，再接微量输液泵。……