宝荣，王欣，王佾，关海霞

（1.重庆市第九人民医院 病理科，重庆 400700；2.中国医科大学 附属第一医院内分泌科，内分泌研究所，沈阳 110001）

甲状腺癌是人类最常见的内分泌恶性肿瘤，组织学上可分为甲状腺乳头状癌（papillary thyroid cancer，PTC）、滤泡状癌 （follicular thyroid cancer，FTC）、髓样癌（medullar thyroid cancer，MTC）和未分化癌等，其中PTC占所有甲状腺癌的80%～85%。近年来，PTC已经成为发病率增加最快的恶性肿瘤之一［1］。寻找有助于诊断PTC和评估其预后的标志物对PTC临床治疗策略的制定至关重要。本研究拟通过探讨肝素结合细胞因子Midkine（MK）在PTC中的表达及其与肿瘤生物学特征的关系，研究MK表达与PTC中的重要基因突变——BRAF基因突变［2］的关系，为PTC临床诊治策略的制定提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选择2002年至2006年在菏泽市立医院行手术治疗的PTC病例100例（男17例，女83例，年龄16～66岁，平均年龄45岁）；甲状腺腺瘤病例30例（男9例，女21例，年龄25～65岁，平均年龄48岁），以及癌对侧正常甲状腺组织20例（男3例，女17例，年龄17～57岁，平均年龄43岁）。上述标本均经10%福尔马林浸泡固定，石蜡包埋，4 μm切片。对PTC病例，收集其肿瘤生物学特征资料，包括肿瘤的甲状腺外侵袭情况、淋巴结转移和肿瘤分期。肿瘤分期参照美国癌症联合委员会现行标准［3］。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化：免疫组化染色采用SP法。MK抗体购自美国Abcam公司，SP试剂和AEC显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。阳性对照采用已知的阳性对照片，阴性对照使用磷酸盐缓冲液代替一抗进行，所有对照均与研究标本在同一条件下进行染色。采用双盲法判定MK阳性表达，以肿瘤细胞膜、胞质出现淡红色至深红色颗粒为阳性。……