郭东春，孙 ,2，刘家森，姜 骞，司昌德，林 欢，曲连东*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心，黑龙江哈尔滨150001；2.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆163319)

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida，Pm)可以引起猪肺疫、牛羊出败、禽霍乱等疾病，是一种重要的致病菌。鸭Pm是鸭霍乱的病原，为鸭养殖业中重要的细菌性传染病之一[1]。该菌在世界各国广泛流行，在我国规模化养禽场中也时有发生。

革兰阴性细菌的外膜蛋白(Outer membrane proteins，OMPs)在致病过程中起着重要的作用，同时作为细胞膜中的一种重要成分具有良好的免疫原性，在免疫方面的作用越来越受关注。不同血清型分离株间的OMPs具有共同抗原成分，可以产生交叉保护作用。Omp H是Pm的主要外膜蛋白，可以诱导产生高水平的保护性抗体。Chevalier等认为Omp H位于菌体表面，是一种孔道形成蛋白，属于非特异性细菌外膜脂蛋白超家族[2]。Luo等研究表明纯化的天然Omp H诱导的保护率与全菌的保护率相当；Omp H和全菌都能诱导高水平的ELISA抗体[3]。

本研究设计两对引物扩增了鸭Pm C48-102株的Omp H基因，同时实现了去信号肽的Omp H基因在大肠杆菌中的表达。

1 材料和方法

1.1 菌株和质粒 鸭源Pm株C48-102购自中国兽医药品监察所；大肠杆菌DH5α、BL21(DE3)、质粒pPRO-EX-htb由本实验室保存；pMD18-T购自宝生物工程(大连)有限公司。

1.2 酶及主要试剂 EX-TaqDNA聚合酶、T4 DNA连接酶和限制性内切酶购自宝生物工程(大连)有限公司；DNA凝胶回收试剂盒购自上海华舜公司；鸭抗Pm阳性血清由本实验室制备；HRP标记的羊抗鸭IgG购自KPL公司。……