茨城病病毒S7基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立

2010-08-07张文龙殷吉吉吴东来王君伟

中国预防兽医学报 2010年7期

张文龙，殷吉吉，吴东来*，王君伟

(1.东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001)

茨城病(Ibaraki disease，IBAD)是由呼肠孤病毒科环状病毒属的流行性出血热病毒群的茨城病病毒(Ibaraki virus，IBAV)引起的牛急性、热性传染病。该病曾在东南亚、澳洲和美洲地区多次暴发，给养牛业造成了一定的经济损失。我国的《中华人民共和国进境动物一、二类传染病、寄生虫病名录》中将其列为二类传染病。

目前，IBAV的血清学检测方法主要是中和试验、血凝抑制试验和琼脂免疫扩散试验。但以上方法存在耗时多、敏感性较低等不足。因此，需要建立一种简捷、敏感性高的血清学检测新方法。

IBAV的VP7蛋白是构成内层衣壳的蛋白之一，由病毒的S7基因节段编码，全长352个氨基酸[1]，分子量38 ku[1]。VP7蛋白高度保守，属群特异性抗原[2]。这种保守性使得VP7蛋白在病毒感染的血清学诊断方面受到关注[3-5]。VP7蛋白单体分为上、下两个结构域。上层结构域较小，由多肽链的中央1/3区域构成(121 aa～249 aa)，这一结构域位于核心颗粒的最外层，在成熟的病毒粒子中与外层衣壳相互作用。该区域亲水性和抗原性较强。本研究对IBAV No.2株的VP7蛋白中抗原性、亲水性较强的部分(102 aa～293 aa)进行了截短表达，获得了可溶性且抗原性良好的截短VP7蛋白，并利用纯化的截短VP7蛋白作为包被抗原建立了IBAV抗体间接ELISA检测方法。